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乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒

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  • 2025年07月09日
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      100

    • 英文名

      Acetylcholinesterase (AchE) test kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/96样

    产品细节图片1
    乙酰胆碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒

    微量法 100T/96S

    注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

    测定意义:

    AchE 属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱(Ach) 水解,在神经传导调节中起重要作用。

    测定原理:

    AchE 催化 Ach 水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基ben甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基ben甲酸(TNB);TNB 在 412nm 处有吸收峰,通过测定 412  nm 吸光度增加速率,计算 AchE活性。

    自备仪器和用品:

    可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

    试剂组成和配制:

    试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
    试剂三:粉剂×1 支,4℃保存。临用前加入 1.3 mL 试剂二,充分震荡溶解。
    试剂四:粉剂×1 支,4℃保存。临用前加入 1.3 mL 试剂二,充分震荡溶解。

    粗酶液提取:

    1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。
    2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1  的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
    3. 血清等液体:直接测定。

    测定操作:

    1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。
    2. 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。
    3. 取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 20μL 上清液、160 μL 试剂二、10μL 试剂三和 10μL 试剂四,迅速混匀,于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光值记为 A2。△A 测定管=A2-A1。
    注意:空白管只需测定一次。

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    AchE 活性计算:

    1. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    1. 组织 AchE 活性
    1. 按照蛋白浓度计算
    活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
    AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(Cpr ×V 样)÷T
    = 245×△A÷Cpr
    1. 按照样本质量计算
    活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
    AchE 酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(W ×V 样÷V 样总)÷T
     
    = 245×△A÷W
    1. 细菌、细胞 AchE 活性
    活性单位定义:每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
    AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
    = 245×△A÷细胞数量
    1. 血清 AchE 活性
    活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
    AchE 酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷V 样÷T
    =245×△A
    ε:TNB 摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;V 样总:提取液体积,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);V 样:加入上清液体积(mL),0.02 mL;W  :样品质量;T:反应时间(min), 3 min。
    1. 使用 96 孔板测定的计算公式如下
    1. 组织 AchE 活性
    1. 按照蛋白浓度计算
    活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
    AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(Cpr ×V 样)÷T
    = 490×△A÷Cpr
    1. 按照样本质量计算
    活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
    AchE 酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(W ×V 样÷V 样总)÷T
    = 490×△A÷W
    1. 细菌、细胞 AchE 活性
    活性单位定义:每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
    AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
    = 490×△A÷细胞数量
    1. 血清 AchE 活性
    活性单位定义:每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
    AchE 酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷V 样÷T
    =490×△A
    ε:TNB 摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;d:96 孔板光径,0.5 cm;V 反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;V 样总:提取液体积,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);V 样:加入上清液体积(mL),0.02 mL;W  :样品质量;T:反应时间
    (min),3 min。

    产品细节图片4

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