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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Acetylcholinesterase (AchE) test kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/96样

乙酰胆碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒
微量法 100T/96S
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义:
AchE 属于丝氨酸水解酶,广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱(Ach) 水解,在神经传导调节中起重要作用。测定原理:
AchE 催化 Ach 水解生成胆碱,胆碱与二硫对硝基ben甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基ben甲酸(TNB);TNB 在 412nm 处有吸收峰,通过测定 412 nm 吸光度增加速率,计算 AchE活性。自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。试剂组成和配制:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。试剂三:粉剂×1 支,4℃保存。临用前加入 1.3 mL 试剂二,充分震荡溶解。
试剂四:粉剂×1 支,4℃保存。临用前加入 1.3 mL 试剂二,充分震荡溶解。
粗酶液提取:
- 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。
- 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
- 血清等液体:直接测定。
测定操作:
- 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零。
- 试剂二置于 37℃水浴中预热 30min。
- 取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 20μL 上清液、160 μL 试剂二、10μL 试剂三和 10μL 试剂四,迅速混匀,于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光值记为 A2。△A 测定管=A2-A1。
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AchE 活性计算:
- 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
- 组织 AchE 活性
- 按照蛋白浓度计算
AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(Cpr ×V 样)÷T
= 245×△A÷Cpr
- 按照样本质量计算
AchE 酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(W ×V 样÷V 样总)÷T
- 细菌、细胞 AchE 活性
AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
= 245×△A÷细胞数量
- 血清 AchE 活性
AchE 酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷V 样÷T
=245×△A
ε:TNB 摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;V 样总:提取液体积,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);V 样:加入上清液体积(mL),0.02 mL;W :样品质量;T:反应时间(min), 3 min。
- 使用 96 孔板测定的计算公式如下
- 组织 AchE 活性
- 按照蛋白浓度计算
AchE 酶活(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(Cpr ×V 样)÷T
= 490×△A÷Cpr
- 按照样本质量计算
AchE 酶活(nmol/min/g 鲜重)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(W ×V 样÷V 样总)÷T
= 490×△A÷W
- 细菌、细胞 AchE 活性
AchE 酶活(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
= 490×△A÷细胞数量
- 血清 AchE 活性
AchE 酶活(nmol/min /mL)= (△A÷ε÷d×V 反总×109)÷V 样÷T
=490×△A
ε:TNB 摩尔消光系数,13.6×103 L/mol/cm;d:96 孔板光径,0.5 cm;V 反总:反应体系总体积(L),200μL=2×10-4L;V 样总:提取液体积,1 mL;106:1mol=1×106μmol;Cpr:蛋白浓度(mg/mL);V 样:加入上清液体积(mL),0.02 mL;W :样品质量;T:反应时间
(min),3 min。
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人乙酰胆碱酯酶抗体(AchE Ab)酶联免疫分析(ELISA)
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乙酰胆碱酯酶和胆碱酯酶 组织化学染色法 胆碱酯酶属于特异性酯酶,分为乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)和胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)两类。其活性中心是丝氨酸。乙酰胆碱酯酶具有水解乙酰胆碱的作用,广泛分布于神经细胞的粗面内质网、线粒体、核周膜和突触前膜,尤以胆碱能神经元的含量为高,其活性是神经细胞性质和功能的重要参考指标,也是神经系统发育过程中神经细胞分化的一个指标。乙酰胆碱酯酶亦存在于运动终板、肌细胞、红细胞和肝内。胆碱酯酶主要分布
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