离心管架

【资源】实验三 质粒DNA的酶切

1．目的 学会用限制性内切酶切割质粒DNA。 2．原理 II型限制性内切酶能识别双链DNA内部的特殊序列并在识别位点处将双链切断，形成粘性末端或齐平末端，通过电泳酶切后的DNA混合物能够确认和分离酶切片段。 3．器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml微量离心管，双面微量离心管架，水漂，恒温水浴。 4．试剂 Pinpoint™xa-3质粒，EcoR V，BamH I，内切酶缓冲液（10×），10×电泳加样缓冲液，荧光染料。 5．实验准备 配制TAE电泳

外源基因的诱导表达

1．目的 了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。 2．原理 外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长，lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG（异丙基硫代-b-D-半乳糖），解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-PAGE或Western-blotting检测。 3．器材 旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，50ml 微量离心管，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式

外源基因在原核细胞中的诱导表达

旋涡混合器，微量移液取样器，移液器 吸头，50ml 微量离心管，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式冷冻离心机，制冰机，恒温摇床，分光光度计，超净工作台，恒温培养箱，摇菌试管，三角烧瓶，接种环。 4.试剂 LB培养基(加抗菌素)，100mg/ml IPTG，20%葡萄糖。 5.实验准备 无菌ddH2O，1.5ml离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器 吸头装入相应的吸头盒(灭菌)，牙签(灭菌)，摇菌管(灭菌)，100mg/ml IPTG