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- XK-SJH-A211
- 国产
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Ascorbate Oxidase (AAO) Activity Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
分光光度法 50 管/48 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义：
AAO 是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO 与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素 b 还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。测定原理：
AAO 可直接氧化 AsA，通过测定 AsA 的氧化量，可计算得 AAO 活力。实验中所需仪器及设备：低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。试剂组成和配制：
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。粗酶液提取：
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
AAO 测定操作：
- 分光光度计预热 30 min，调节波长到 265 nm，蒸馏水调零。
- 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。
- 依次在 1 mL 石英比色皿中加入 100μL 上清液、850μL 预热的试剂二和 50μL 试剂三，迅速混匀后在 265nm 测定 10 s 和 130 s 光吸收 A1 和 A2，△A =A1-A2。
AAO 活性计算公式：
- 按蛋白浓度计算
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T
= 92.4×△A÷Cpr
- 按样本质量计算
AAO(nmol/min/g 鲜重) = △A÷(ε×d）×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T
= 92.4×△A÷W
ε：AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V 反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10-3 L；106：1mol=1×109nmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。
注意事项:
配制好的试剂放在 4℃保存，三天内使用完。
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文献和实验D 型氨基酸氧化酶（DAAO）与过氧化氢检测试剂盒联用，对产物中的 D 型氨基酸的总量进行评价。结果显示只有芽孢杆菌属和类芽孢杆菌属的肠道菌能够产生 D 型氨基酸，且在芽孢杆菌属内，菌株在种和菌株的水平上产 D 型氨基酸的能力也有差异，并与 16S rRNA 相似度没有明显的相关性（图 2），暗示单纯依靠 16S rRNA 测序获得微生物组菌种组成信息，无法准确预测菌群合成 D 型氨基酸的水平。 图 2：DAAO 法评估大鼠肠道菌生产 D 型氨基酸的能力与 16S rRNA 的关系 最后
佚名 体内催化氧化反应的酶有许多种，按照其催化氧化反应方式不同可分为三大类。 (一)脱氢氧化酶类 这一类中依据其反应受氢体或氧化产物不同，又可以分为三种。 1.氧化酶类(oxidases) 氧化酶直接作用于底物，以氧作为受氢体或受电子体，生成产物是水。氧化酶均为结合蛋白质，辅基常含有Cu2+，如细胞色素氧化酶、酚氧化酶、抗坏血酸
铜蓝蛋白（ceruloplasmin,CER）是一种含铜的α2 糖蛋白，分子量约为12万-16万，不易纯化。目前所知为一个单链多肽，每分子含6-7个铜原子，由于含铜而呈蓝色，含糖约10%，末端唾液酸与多肽链连接，具有遗传上的基因多形性。 CER具有氧化酶的活性，对多酚及多胺类底物有催化其氧化的能力。最近研究认为CER可催化Fe2 氧化为Fe3 。对于CER是否是铜的载体存在不同看法。血清中铜的含量虽有95%以非扩散状态处于CER，而有5%呈可透析状态由肠管
