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- Xkbio
- XK-SJH-A289
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Glutamate Dehydrogenase (GDH) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GDH）试剂盒
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成， 在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
测定原理：
GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通过测定 340nm 吸光度的下降速率，计算 GDH 活性。需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存；粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 样本测定
- 在试剂二中加入 25mL 试剂一充分溶解混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用（配好后 12h 内用完）；
- 取 0.05mL 样本和 0.95mL 工作液于 1mL 比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时， 在340 nm 波长下记录20 秒时的初始吸光度A1 和5 分20 秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
1、血清（浆）中GDH 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷V 样÷T= 643×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:
- 按样本蛋白浓度计算：
GDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷( V 样×Cpr) ÷T= 643×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算：
GDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷( W× V 样÷V 样总) ÷T= 643×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算：
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文献和实验实验表明脑内谷氨酸合成的原料是葡萄糖，它来自血糖。葡萄糖进入脑细胞后先转变成α－酮戊二酸(α－KG)，后者可在谷氨酸脱氢酶的催化下转变成谷氨酸，亦可经转氨基作用生成谷氨酸，一般认为后一途径更切合实际，因为谷氨酸脱氢酶(GDH)催化逆反应时K�mNH4＋为8mM，远高于细胞内氨之浓度。谷氨酸在谷氨酰胺合成酶的作用下与氨结合成为谷氨酰胺，这是一个耗能反应(消耗ATP)，脑中谷氨酰胺合成酶的活性强，其K�mNH4＋仅为0.39mM。所生成的谷氨酰胺，与谷氨酸不同，可以通过血脑屏障而进入血中，这样，脑组织从血
素示踪实验表明脑内谷氨酸合成的原料是葡萄糖，它来自血糖。葡萄糖进入脑细胞后先转变成α－酮戊二酸(α－KG)，后者可在谷氨酸脱氢酶的催化下转变成谷氨酸，亦可经转氨基作用生成谷氨酸，一般认为后一途径更切合实际，因为谷氨酸脱氢酶(GDH)催化逆反应时K�mNH4＋为8mM，远高于细胞内氨之浓
水解，生成新的甘油，达到新的平衡，因此样品与R1试剂孵育时间越长，测得甘油三酯值就越低。甘油三酯测定，不仅要去除游离甘油，而且还要克服样本含量真实性发生的变化，试剂中必须加入甘油激酶，并且延迟时间要标准化。所以，一些试验项目在消除内源性物质干扰的同时，会带来样品含量真实性的变化。 参考文献 [1]韩志钧，黄志锋，卢业成，主编．临床化学常用项目自动分析法[M]．沈阳：辽宁科学技术出版社，2005．29—112． [2]张万忠．临床生化试剂盒质量评估方法[J]．上海
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