Omn-04 microRNA 提取试剂盒

Omn-04 microRNA  提取试剂盒

产品 简介 
microRNA 提取试剂盒是一款专门用于提取 miRNA 等小 RNA（5 s RNA）的系统，可以快速的
从细胞和组织中提取高纯度的 microRNA，同时去除 28 s 和 18 s RNA，用于反转录、测序等生物学
实验。

特点与优势
1. 本试剂盒提取的 microRNA 纯度高，几乎不含 28 s 和 18 s RNA。
2. 本试剂盒无需酚/ 氯仿抽提，及氯化锂或异丙醇沉淀，显著提高实验操作的安全性。

使用说明
1. 试剂配制：
a) Wash Buffer C（去蛋白液）配制。在 Wash Buffer C 试剂中加入 21 mL 无水乙醇，混匀。
b) Wash Buffer D（漂洗液）配制。在 Wash Buffer D 试剂中加入 24 mL 无水乙醇，混匀。
2. 细胞和组织裂解。
1)  细胞裂解。
a) 贴壁细胞裂解。胰酶消化法收集细胞并计数，按照细胞数量添加一定体积的裂解液。或根据
细胞培养皿大小，直接加入裂解液，利用移液器吹打，混匀，转移到 EP 管中，室温裂解 2 min。
Omiget
技术促进创新 microRNA 提取试剂盒说明书
b) 悬浮细胞裂解。离心收集悬浮细胞并计数，按照细胞数目添加一定体积的裂解液，混匀，室
温裂解 3 min。
表 表 1.  裂解液体积 统计 表 （细胞）
2)  动物组织裂解。将组织块加入裂解液中，利用手持式匀浆器破碎组织，室温裂解 3 min，再
12,000×g，4 ℃离心 3 min，弃沉淀，上清转移至新的 EP 管，即为组织裂解液。
表 表 2.  裂解液体积 统计 表 （组织）
组织块重量（mg）  裂解液体积（μL）
≤10 350
10-20 600
3. 细胞或组织裂解液中加入等体积的 70%乙醇，混匀，转入 RNA 纯化柱。
4. 12,000×g，4 ℃离心 30 sec，弃纯化柱（柱上吸附了 28 s 和 18 s RNA，若需要这两种类型的 RNA，
则洗涤纯化柱，用 Elution Buffer R 洗脱即可），收集滤液 （含有 microRNA ）。
5. 向滤液中加入 450 μL 无水乙醇，混匀。
6. 取 600 μL 混合液加入新的 RNA 纯化柱中，12,000×g，4 ℃离心 30 sec，弃滤液。
7. 将剩余的混合液加入对应的 RNA 纯化柱中，12,000×g，4 ℃离心 30 sec，弃滤液。
8. 向 RNA 纯化柱中加入 500 μL Wash Buffer C（去蛋白液），12,000×g，4 ℃离心 30 sec，弃滤液。
9. 向 RNA 纯化柱中加入 500 μL Wash Buffer D（漂洗液），12,000×g，4 ℃离心 2 min，弃滤液。
10. 将 RNA 纯化柱插入新的 RNase-free EP 管中，向柱中央滴加 100 μL Elution Buffer R（洗脱液）
或 RNase-free ddH 2 O，室温静置 2 min。
11. 12,000×g，4 ℃离心 2 min，得到 microRNA 溶液。
12. 立即用于反转录实验，或保存于-80 ℃冰箱。