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- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Alanine aminotransferase (GPT) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义
GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞 GPT 活性很高，当肝细胞坏死，GPT 释放到血液中，血清 GPT 活性显著增高。因此，GPT 被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。测定原理
GPT 催化丙氨酸和 α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成bing酮酸和谷氨酸；加入 2,4-二硝基ben肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成bing酮酸ben腙；ben腙在碱性条件下呈红棕色，可以在 505nm 读取吸光值并计算酶活力。试验中所需的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂二：液体 3 mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂三：液体 30 mL×1 瓶，4℃保存；
样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零。2、 在 EP 管或在 96 孔板中加入下列试剂
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 待测样本 | 10 | |
| 煮沸 10min 的待测样本 | 10 | |
| 试剂一 | 25 | |
| 蒸馏水 | 25 |
| 试剂二 | 25 | 25 |
| 试剂三 | 240 | 240 |
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计算
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
2、血清（浆）GPT 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol bing酮酸定义为一个酶活力单位。
GPT（nmol/min/mL）=（ΔA-0.0003）÷0.4228÷T×103=118.26×（ΔA-0.0003）
3、细胞、细菌和组织中 GPT 活力的计算
- 按样本蛋白浓度计算：
÷Cpr
ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =118.26×（ΔA-0.0003）
- 按样本鲜重计算：
GPT（nmol/min/g 鲜重）=[（ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =118.26×
（ΔA-0.0003）÷W
- 按细菌或细胞密度计算：
GPT（nmol/min/104 cell）=[（ΔA-0.0003）÷0.4228×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.236×
（ΔA-0.0003）
V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，20min； Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；103：1umol/mL=103 nmol/mL。
- 使用 96 孔板测定的计算公式如下：
2、血清（浆）GPT 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol bing酮酸定义为一个酶活力单位。
GPT（nmol/min/mL）=（ΔA-0.0003）÷0.2114÷T×103=236.5×（ΔA-0.0003）
3、细胞、细菌和组织中 GPT 活力的计算
- 按样本蛋白浓度计算：
÷Cpr
ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =236.5×（ΔA-0.0003）
- 按样本鲜重计算：
÷W
ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =236.5×（ΔA-0.0003）
- 按细菌或细胞密度计算：
GPT（nmol/min/104 cell）=[（ΔA-0.0003）÷0.2114×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.473×
（ΔA-0.0003）
V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，20 min； Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；103：1umol/mL=103 nmol/mL。
1、 标准曲线线性范围为：0.01 umol/mL -2 umol/mL。
2、 ΔA 线性范围为：0.01 -1。
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文献和实验催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶。普遍存在于动物、植物组织和微生物中，心肌、脑、肝、肾等动物组织以及绿豆芽中含量较高。种类很多，体内除赖氨酸、苏氨酸中外，其余α－氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。前者是催化谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，后者是催化谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用。COT以心脏中活力最大，其次为肝脏；GPT则以肝脏中活力最大，当肝脏细胞损伤时，GPT则以肝脏中活力最大，当肝脏细胞损伤时，GPT释放到血液
【目的和要求】 1. 了解谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2. 掌握谷丙转氨酶活性测定的方法。 【实验原理】 血清谷丙转氨酶(SGPT)能催化丙氨酸和α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸在酸性条件下与2，4－二硝基苯肼可缩合生成丙酮酸二硝基苯腙，其在碱性条件下呈现棕红色，在520nm处有最大吸收。根据颜色的深浅，通过比色法可计算出酶活性。GPT在肝脏中含量最多，当某种药物对肝脏早晨损害或病毒肝炎的急性阶段，由于肝细胞受损， GPT就释放到血液中，使血清中此酶水平
肝功能检验在临床上常用于肝脏疾病的诊断、治疗及预后观测，它对于判断肝脏有无损伤、查明原因、鉴别黄疸有着重要的参考价值。 1 酶类测定 1.1 谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT） 正常情况下，二者在血清中活力很低。当肝细胞受损时，细胞内的酶大量释放入血液中，使血清中二者的活力显著提高，但GPT升高程度大于GOT，并且由于GOT的释放不是特异性的，因此，至今仍以GPT最为敏感，临床价值最大。各种肝病
