2×Lab FastHF PCR MasterMix

2×Lab FastHF PCR Master Mix



货号：FH0201
储存温度：－20°C保存2年。短时间（1个月内）使用可以置4°C

制品说明：
本产品包含Lab FastHF DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。 FastHF DNA Polymerase来自于基因工程改造的pfu，大大提高了扩增速度、保真性和产量。Lab FastHF PCR Master Mix是非长片段超保真快速扩增的首。选产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为平末端，不需要加A头，可直接用LabpO TOPO-Blunt平末端系列载体（货号PB0101、PB0102）克隆。
产品特点： 
1. 扩增速度快：延伸速度可以达到2-4kb/min，是pfu的4-8倍。
2. 扩增产量高：一般PCR产物量比传统pfu产量高50%-100%。
3. 优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变菌落。
4. 扩增长度指标和pfu一致，可以完全替代pfu进行快速高保真扩增，但不建议用于pfu无法扩增的长片段。以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过3kb左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过6kb左右的产物。

建议PCR体系设置：

Component	25 μl Reaction	50 μl Reaction	Final Concentration
2× A8 PCR MasterMix	12.5 μl	25 μl	1 ×
Forward Primer(10 μM)	0.5 μl	1 μl	0.2 μM
Reverse Primer(10 μM)	0.5 μl	1 μl	0.2 μM
Template DNA	as required	as required
ddH2O	up to 25 μl	up to 50 μl

参考模板用量（50 μl 反应体系）：
质粒：0.1-10ng；细菌基因组：10-100ng；人类基因组：50-150ng；cDNA：1-5μl from RT reaction。
建议 PCR 循环条件：

Step	Temperature	Time	Cycle Number
Initial denaturation	95oC	3 minutes
Denaturation	95oC	10 seconds	30 cycles
Annealing	55oC	10-15 seconds
Extension	72oC	15-30 seconds / kb
Final Extension	72oC	2-5 minutes
	4-8oC	Hold

注意事项：
1. Lab FastHF DNA Polymerase扩增速度快，质粒和简单基因组等简单模板可以采用15-20 秒/kb；复杂模板如人类基因组可以采用30-45 秒/kb。
2. 对于GC含量很高的模板，预变性和变性温度可以提高到98^oC。Lab FastHF DNA Polymerase耐热性强，98^oC对Lab FastHF DNA Polymerase的活性无改变。
5. 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%-8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）