- ￥896
- LABLEAD
- FH0201-5ML
- 2025年12月27日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃冻存
- 规格：
5ml
货号：FH0201
储存温度：－20°C保存2年。短时间（1个月内）使用可以置4°C
制品说明：
本产品包含Lab FastHF DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。 FastHF DNA Polymerase来自于基因工程改造的pfu，大大提高了扩增速度、保真性和产量。Lab FastHF PCR Master Mix是非长片段超保真快速扩增的首。选产品。本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。PCR产物为平末端，不需要加A头，可直接用LabpO TOPO-Blunt平末端系列载体（货号PB0101、PB0102）克隆。
产品特点：
1. 扩增速度快：延伸速度可以达到2-4kb/min，是pfu的4-8倍。
2. 扩增产量高：一般PCR产物量比传统pfu产量高50%-100%。
3. 优异保真性：保真度是taq的54倍以上。一般随机挑一个菌测序便是正确无突变菌落。
4. 扩增长度指标和pfu一致，可以完全替代pfu进行快速高保真扩增，但不建议用于pfu无法扩增的长片段。以复杂基因组DNA为模板适合扩增不超过3kb左右的产物，以简单基因组、质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增不超过6kb左右的产物。
建议PCR体系设置：
| Component | 25 μl Reaction | 50 μl Reaction | Final Concentration |
| 2× A8 PCR MasterMix | 12.5 μl | 25 μl | 1 × |
| Forward Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
| Reverse Primer(10 μM) | 0.5 μl | 1 μl | 0.2 μM |
| Template DNA | as required | as required | |
| ddH2O | up to 25 μl | up to 50 μl |
质粒：0.1-10ng；细菌基因组：10-100ng；人类基因组：50-150ng；cDNA：1-5μl from RT reaction。
建议 PCR 循环条件：
| Step | Temperature | Time | Cycle Number |
| Initial denaturation | 95oC | 3 minutes | |
| Denaturation | 95oC | 10 seconds | 30 cycles |
| Annealing | 55oC | 10-15 seconds | |
| Extension | 72oC | 15-30 seconds / kb | |
| Final Extension | 72oC | 2-5 minutes | |
| 4-8oC | Hold |
注意事项：
1. Lab FastHF DNA Polymerase扩增速度快，质粒和简单基因组等简单模板可以采用15-20 秒/kb；复杂模板如人类基因组可以采用30-45 秒/kb。
2. 对于GC含量很高的模板，预变性和变性温度可以提高到98oC。Lab FastHF DNA Polymerase耐热性强，98oC对Lab FastHF DNA Polymerase的活性无改变。
5. 如果扩增模板GC含量高或者模板复杂扩增效果不佳时，可在反应混合物中加入DMSO到终浓度1%-8%，按照1%梯度增加摸索最佳浓度。或者加入甜菜碱至终浓度1.0-1.7 M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）
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文献和实验μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer （ 10 μM 1-5 μL 下游 Primer （ 10 μM ） 1-5 μL 模板 lamid DNA ～ 50 ng genomic DNA ～ 1000 ng cDNA ～ 500 ng 粗提液 ～ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例： 一、plasmid DNA 扩增 1．提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100，250，500
x BSA.Mix well. 14.Split the samples into (+)and (-)antibody samples of equal volume,making sure you choose an amount that will allow you to withhold 10% of the IP sample volume for your “10% input” samples that you need later for PCR,as well as having
章）。如果使用GSP，确保引物的Tm值与预计的保温温度相同。不要在高于60℃时使用oligo(dT)和随机引物。随机引物需要在增加到60℃前在25℃保温10分钟。除了使用较高的逆转录温度外，还可以通过直接将RNA/引物混合物从65℃变性温度转到逆转录保温温度，并加入预热的2×的反应混合物提高特异性（cDNA热启动合成）。这种方法有助于防止较低温度时所发生的分子间碱基配对。使用PCR仪可以简化RT-PCR所需的多种温度切换。 图6 温度对不同模板的影响 使用
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