- ￥2598.75
- LABLEAD
- 北京
- PGM025
- 2026年08月09日
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- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
4℃或-20℃
- 供应商：
LABLEAD
- 规格：
25T
存储条件：IP buffer存储于-20°C，GFP-Magnetic beads可在4℃保存1年，或在-80℃长期保存。请根据各组分适合储存条件存放，并避免反复冻融。
试剂盒组分
| 货号 | 名称 | 规格 |
| GNM-25-1000/GNM-50-2000 | GFP-Magnetic | 1000ul(25T)/2000ul(50T) |
| IP001A | 裂解液A | 30ml |
| IP001B | 裂解液B | 30ml |
| IP001C | 漂洗液C | 30ml |
| IP001D | 漂洗液D | 30ml |
| IP001E | 洗脱液E | 3x1ml |
| CLJ0615 | 1.5ml，6孔磁力架 | 个 |
产品简介
LABLEAD的免疫沉淀beads是基于基因工程改造的纳米抗体开发的；纳米抗体由传统抗体的重链可变区（VHH）组成，具有分子量小、亲和力高、特异性强，且耐酸碱高温环境等特点；基于纳米抗体的优点，LABLEAD的免疫沉淀beads避免了免疫沉淀结果出现轻重链污染的现象，并且节省实验时间。
实验步骤：
提示：尽量在4℃进行操作，洗脱蛋白方法一除外。
1.收集细胞：
根据实验要求收集适量的细胞，通常每个免疫沉淀反应大约使用 106-107 个细胞。
2.裂解细胞：
根据实验要求选择使用溶液A或溶液B裂解细胞。在溶液A或溶液B中加入蛋白酶抑制剂，用500μl预冷的溶液A或溶液B重悬细胞；置于冰上30分钟，可每10分钟充分吹打一次；4℃，20,000g离心15分钟，将裂解产物（上清）转移到一个新的预冷管中，丢弃沉淀。
3.平衡珠子：
振荡充分混匀珠子， 吸取40μl GFP beads到500μl预冷的溶液A或溶液B中，4℃，2,500g离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液。
4.结合蛋白：
将平衡好的beads加入到细胞裂解产物中，于4℃旋转混合结合30min-1h。
5.清洗珠子：
根据实验要求选择使用溶液C或溶液D清洗beads。4℃，2,500g离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液。用500μl预冷的溶液C或溶液D重悬beads，4℃，2,500g条件下离心2分钟，或利用磁性分离，丢弃上清液并重复洗涤3次。
6.洗脱蛋白
方法一：
加入20μl 2×SDS-sample buffer重悬beads。95℃，加热10min充分变性，2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清，收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
方法二：
加入溶液E洗脱结合的蛋白，孵育时间30秒，期间不断混匀，2,500g离心2分钟或利用磁性分离收集上清，为了中和酸性的甘氨酸，需加入5μl 1.0 M Tris（pH10.4）。
注意：为了提高洗脱效率可以重复这一步。收集的产物可进行SDS-PAGE及免疫印迹分析。
注意事项
1、关于裂解液的选择：
裂解液A为温和裂解液，裂解液B为强裂解液，请根据自己实验样本选择相应的裂解液，如：若为胞质蛋白可选裂解液A或者A与B混合使用，若为核蛋白则可选择裂解液B。
漂洗液C和漂洗液D的选择（裂解液D为高盐溶液，可能会破坏蛋白间较弱的相互作用），若两个 蛋白相互作用强，同时还想减少非特异性结合，可选D；若两个蛋白相互作用弱的优先C。
2、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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询价记录
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文献和实验，小心收集上清液（血清），立即进行测定。建议在-20℃或-80℃下将收集的血清分装保存，避免反复冻融。 在收集血液样本的过程中应避免溶血，因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质，这种情况下，ELISA实验中将会出现非特异性显色反应，导致检测结果不准确。另外，样本还应避免细菌污染，因为细菌可能含有内源性HRP，也会导致检测结果不准确。 血浆 使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本，采集后30分钟内，2-8℃下以1000×g离心15分钟，小心收集上清液（血浆）。建议在-20℃或-80
2. 实验仪器：酶标比色计、96 孔板、移液枪、离心管、离心管盒3. 所需试剂及试剂盒：碳酸盐包被缓冲液、抗体球蛋白、吐温-20、柠檬酸、硫酸二、实验操作1. 包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 μg /ml），每凹孔加 0.3 ml，4℃ 过夜，或 37℃ 水浴 3 小时，贮存冰箱。2. 洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含 0.05% 吐温-20）洗 3 次，每次 5 分钟。3. 每凹孔加入 0.2 ml 用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37
液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7、培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP,可观察到绿色荧光）。四、重组病毒鉴定 1、转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2、取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞病变。 3、感染后3-5d，当1/3-1/2细胞漂浮时
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