蛋白表达-毕赤酵母真核表达小样（标准项目）

【求助】始终不能得到可溶的蛋白表达

zhubest 我正在克隆一个八百多bp的基因，换了很多载体，表达条件换了不少，可始终不能得到可溶的蛋白表达，哪位大师能够支招，可以提供一些表达条件，谢谢了 freecell 可以尝试真核表达系统，例如杆状病毒系统或者毕赤酵母。 vbvbvbfgiw 先得确定连接转化都成功了吧，换一种裂解细胞的方法试试（溶剂），使你的蛋白溶解。 版主freecell留言:

【原创】蛋白质不表达：常见原因及分析

子的载体，必须选择合适的宿主菌进行表达。因此，当你的蛋白没有表达出来时，可以考虑更换宿主菌。见下图 3.密码子的使用频率低。有些基因其本身含有许多稀有密码子，尤其是起始密码之后的15个碱基之内的稀有密码子，对蛋白表达有着很重要的影响。优化密码子对原核表达似乎效果很好，对真核表达系统未见得有很好的效果。曾经有某人在毕赤酵母表达某蛋白两年未果，试图将密码子优化进行表达，结果还是没有表达。一气之下将该优化的基因序列克隆到原核表达载体，表达量居然出奇地高！这是一个辛酸的笑话，但是一个真实的故事

【转帖】你知道这些蛋白表达的问题吗

基中不含蛋白，有利于下游产品分离纯化； （5）外源蛋白基因遗传稳定。一般外源蛋白基因整合到毕赤酵母染色体上，随染色体复制而复制，不易丢失； （6）作为真核表达系统，毕赤酵母具有真核生物的亚细胞结构，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能。 Q5：一个理想的可诱导蛋白表达系统需要符合哪几个方面的要求？ A5：（1）特异性：该系统不受其他内源因素的影响，仅能被外源的非毒性药物所活化。 （2）非干扰性：该系统成分不能对细胞通路有干扰。 （3）可诱导性：该系统在非活化状态下本底活性