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文献和实验MSCs成骨诱导全流程操作规范与质控要点 还在为干细胞成骨实验踩坑崩溃?这份中乔新舟标准化成骨诱导 SOP 帮你避雷!本文分享中乔新舟标准化 MSCs 成骨诱导分化完整 SOP,覆盖明胶包被、细胞扩增接种、21 天成骨诱导全流程操作规范,梳理换液、孵育、细胞代次等实操避坑要点。干货直接抄,少走一个月弯路。 一、试剂与耗材 成骨诱导分化培养基(中乔新舟PCM-I-002)、0.1%明胶溶液(中乔新舟CSP191)、0.25%Trypsin-EDTA(中乔新舟CSP046)、MSCs完全培养基
培养基或芽尖祖细胞类器官培养基进行培养。 A、培养hLOs 11A、向各孔中加入 0.5ml hLOs 培养基,确保完全覆盖 Matrigel 液滴。每 3-5 天换液一次。 12A、如果类器官出现腔中积攒了细胞碎片,或下沉到 Matrigel 的底部,则用移液管轻轻刮培养孔底部,以解离含有类器官的 Matrigel。 13A、用移液器将 Matrigel 液滴和周围的培养基一同吸出,并放置于显微镜下,轻轻去除旧的 Matrigel,小心不要切到组织。随后将新的类器官转移至 1.5ml 离心
体提取实验。 6、细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取? 会的。在收获细胞时,应确定死亡细胞占比不超过 5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量囊泡,它们在外泌体的提取纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体,同时易堵塞 EPF 纯化柱。 7、准备做细胞外泌体 Small RNA 的 NGS 测序,初始样品量需要准备多少? 普通肿瘤细胞系推荐使用 50mL 以上的初始样品量。由于某些细胞(如悬浮细胞、干细胞、免疫细胞、神经细胞等)中外泌体含量比较低,建议先通过 10 kD~ 100 kD 的超滤
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