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- microRNA研究
- 上海
- 2025年11月12日
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Hanbio汉恒生物
简介
miRNAs与靶基因的3’UTR结合后，一般功能主要表现为抑制mRNA的翻译，为了检测其效果，我们可以用Western Blot的方法检测靶蛋白的表达水平，也可以用qRT-PCR进行检测靶标基因的表达。但是这两种方式都不能有效地说明是miRNAs直接起作用的结果。因此为了检测miRNA靶标的有效性，构建Sensor reporter并进行活性检测，才是对miRNAs与靶基因3’UTR的关系作出准确判断的方法。
服务优势
（1）采用Promega公司特有psiCHECK质粒；
（2）所采用的Luciferase双荧光报告系统，可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度；
（3）采用瞬时转染技术，操作简便、快速，周期短，适用于绝大多数细胞类型。
服务流程
（1）PCR扩增靶基因的3’UTR，或直接合成结合位点序列；
（2）将上述确定的靶基因DNA片段克隆至报告基因载体psiCHECK质粒；
（3）克隆miRNA表达载体；
（4）将报告载体与miRNA表达载体共转染293T细胞；
（5）多功能酶标仪检测报告基因的表达水平；
（6）数据分析，整理提交客户原始数据及项目报告；
注：为了实验的严谨性，可加入靶标基因3’UTR区microRNA预测结合区域的突变体作为对照，进一步说明问题。
附：psiCHECK质粒图谱
汉恒生物实例：
汉恒生物通过合成mimics，构建可能靶基因的3’UTR报告基因系统成功验证miRNA与靶基因的关系。
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文献和实验山大真大 :):):) 我最近在做一个ncRNA 的项目，希望大家能给我提供几款靶基因预测的软件 我自己找过很多但都下不下来。。。 最好能顺便提供教程 zhujoker 呵呵，ncRNA可是一个大范围啊？你需要什么样的靶基因预测的软件？你做的是什么ncRNA，能否说的明确一点？ 山大真大 TargetScan miRanda DIANA2MicroT PicTar
wh861017 求助：我用了三个综合性miRNA靶基因预测软件：starBase、miRecords、TarBase预测miR-155和miR-30a的靶基因，怎么每个软件预测的靶基因个数不一样，而且有的已经被证实的靶基因缺不在预测的靶基因范围内，我该相信哪个软件？急！！！！！ charllu 你可以在PICTAR、MIRBASE、DIANA-MICROT或者Targetscan上再看看，一般这几个网站是比较权威的预测
相关专题 解读miRNA （MicroRNA） miRNA 靶基因预测 与miRNA基因预测相比,靶基因的预测具有更大的难度. 因为目前已知的miRNA靶基因数量非常有限,不能为预测提供充足的依据,而且对预测的候选基因的鉴定步骤相对繁琐,很难实现高通量和规模化. 从已知的miRNA与靶基因的相互作用中,人们得出miRNA5′端的2～8 个核苷酸几乎无一例外地与靶mRNA 3′端UTR 区完全互补
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