- ￥1700
- EZBioscience
- RT3P
- 美国
- 2026年03月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
500
- 英文名：
EZscript All-in-one Reverse Transcription Kit (with DNase)
- 保质期：
2年
- 供应商：
EZBioscience
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100 Rxns×20μl
一、试剂盒简介
本试剂盒为一款基因组DNA去除与逆转录反应在一步进行的新一代快速逆转录试剂盒，与EZBioscience® 4× EZscript Reverse Transcription Mix II (with gDNA Remover) (Cat. No.: EZB-RT2G)相比，不需要单独进行去除基因组DNA的反应，操作更简便，并可有效降低复杂加样过程造成的样品污染与RNA降解的风险。试剂盒中主要包括5管试剂：Enzyme Mix中含有DNase、RNase Inhibitor和逆转录酶；5× EZscript All-in-one RT Buffer中含有buffer、dNTPs等；NC Buffer；Oligo dT18 (20×)和Random Hexamer (20×)。Oligo dT18和Random Hexamer这两种引物独立包装，便于根据需要添加目标片段特异性引物。
本试剂盒采用的新型M-MLV突变体逆转录酶具有很强的抗干扰能力及扩增能力，同时又采用了新优化的反应体系，进一步提高了逆转录效率。使用本试剂盒逆转录15分钟得到的扩增产物量可以达到AMV逆转录酶大约1小时的产物量（Ct值相同）。后续逆转录产物建议用于PCR、qPCR和基因克隆。
二、产品组分
| Components | RT3P (100 Rxns) |
RT3P-L (500 Rxns) |
| Enzyme Mix | 200 μl | 200 μl × 5 tubes |
| 5× EZscript All-in-one RT Buffer | 400 μl | 400 μl × 5 tubes |
| NC Buffer | 20 μl | 20 μl × 5 tubes |
| Oligo dT18 (20×) | 110 μl | 110 μl × 5 tubes |
| Random Hexamer (20×) | 110 μl | 110 μl × 5 tubes |
| Nuclease free ddH2O | 1 ml | 1 ml × 5 tubes |
三、保存条件
所有组分建议保存在 -20°C。
四、试剂盒特点
1. 简单边捷：基因组清除与逆转录一步完成，只需加入RNA模板，15 分钟即可完成反应；
2. 高效的逆转录效率；
3. 超高的cDNA稳定性；
4.Oligo dT18和Random Hexamer这两种引物独立包装，便于根据实验需求添加目标片段特异性引物。
五、注意事项
使用前将 5× EZscript All-in-one RT Buffer、Enzyme Mix、NC Buffer、Oligo dT18 (20×)和 Random Hexamer (20×)或者目标片段特异性引物从-20°C冰箱中取出，充分融化后均需上下颠倒 10次左右使之充分混匀（很重要），短暂离心将管壁上附着的溶液甩下来，然后置于冰上待用。
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文献和实验转录、PCR、逆转录等原理上并无多大差异，只是采用的荧光素种类更多，这可以满足不同来源样品的平行分析。样品制备的常用试剂：对于检测表达的芯片，样品制备通常涉及mRNA的纯化，cDNA的合成，体外转录或者PCR，标记等步骤。而对于SNP或者突变检测，则往往涉及Genomic DNA纯化和PCR标记等步骤。1. RNA纯化：从样品中分离纯化高质量的RNA是非常重要的第一步。由于RNA样品中的DNA碎片会影响后继的PCR反应，所以要彻底除去样品中的DNA。通常用mRNA纯化的方法可以除去DNA片断
录为带T7序列的cDNA，再用Ambion公司的MEGAscript High Yield Transcription Kit进行体外转录，大量扩增mRNA后再用不同的方法制备探针。Ambion公司专利的大规模合成RNA技术可以在较短时间内合成大量RNA，其产量为常规方法的10—50倍，最长可以合成常达16kb的转录本，特别适合少量样品中低丰度的RNA扩增。另外也可以选择Ambion公司的Cell-to-cDNA试剂盒，则可以避免少量样品抽提RNA的麻烦，通过细胞裂解、RNAse失活和DNAse消化
中是否含有逆转录/扩增抑制剂（图 2）。 表 1：阳性内对照和相关试剂盒 图 2：通过 IPC 提示体系中抑制剂的存在。实验结果为同样浓度的 RNA 加入相同拷贝 Xeno IPC，在不同浓度的扩增抑制剂血红素存在下（0-4μM），Xeno IPC 的 Ct 值与目标 RNA 的 Ct 值定量结果。 阳性样本对照 Positive Sample Control 阳性内对照虽然可以在一定程度上反应核酸提取效率，但是却很难反馈提取流程中对核酸释放的效率。一些病原体的样本，尤其是含有革兰
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