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小鼠基因敲除/敲入服务
南京大学—南京生物医药研究院
国家遗传工程小鼠资源库(NRCMM)暨南京大学模式动物研究所(MARC)是中国最大的遗传工程小鼠资源库。 除了拥有500多种小鼠品系外,我们从2005年开始,对外提供基因工程改造小鼠的定制服务,包括转基因(TG)和敲除/敲入(KO/KI)服务。 其中敲除/敲入服务又包括全身性敲除(Conventional KO)、条件性敲除(Conditional KO)、点突变敲入(Target Mutation KI)以及人源化(Humanised) 小鼠的制作以及更为复杂的多次打靶小鼠的制作。我们负责打靶基因的文献调研,根据您的需求量身定制所需要的打靶小鼠,并进行相应的评估,最大限度的节约您的时间和降低风险,得到您满意的特制小鼠模型。我们的流程包括打靶载体设计、ES cells打靶、囊胚注射、小鼠繁育、遗传鉴定以及胚胎冷冻,小鼠定制服务灵活多变,可以随意选择您所需要的服务,您可以自行提供打靶载体(要求见转基因小鼠)以及已经打靶完成的ES cells等,我们可以继续帮您完成后续操作。定制流程:1.打靶载体设计在确定方案后,我们会完成打靶载体的构建在条件型敲除(Conditional KO)策略中,我们会利用同源重组技术。KO First与Conditional KO有相似之处,KO Firs是在Neomycin标记位置的元件更为复杂,是一个带有剪接受体位点的LacZ和Neomycin的合并体。这样,Neomycin作为筛选标记,功能与上述Conditional KO中一致,LacZ就能够作为reporter在目的基因的promoter启动下,与目的基因一同表达,可以方便地对目的基因的表达进行定位。同样,与Flpe表达品系交配可以删除LacZ-neo标记,转变成常规的Conditional KO的flox小鼠。基因敲入(Knock In)是指在需要操作区域定制突变或则将外源基因整合进入此区域。例如在需要操作基因区域将一些特定的DNA片段或者某些报告基因(如EGFP、dsRed、LacZ等)通过同源重组的方式整合进入特定的基因区域,使操作基因区域发生突变或者带上某种报告基因的标记,进而对其进行研究。2.ES cells打靶:之后我们会完成ES电转和阳性克隆筛选(PCR和Southern筛选),目前我们可以提供的ES细胞背景为C57BL/6或129S6,如果有特殊背景需要,请联系询问。3.囊胚注射:打靶之后完成显微囊胚注射4.遗传鉴定:最后对得到的小鼠进行鉴定,得到阳性嵌合小鼠,对阳性小鼠进行可遗传性检测,得到杂合子小鼠,最终向客户提供至少4只基因敲除的F1杂合子小鼠。5.胚胎冷冻:我们将为您提供两年的此小鼠免费胚胎冷冻服务,随时为您提供此小鼠活体,不必担心您宝贵小鼠模型的丢失,以保证您能顺利进行实验。
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