小鼠基因敲除/敲入服务

国家遗传工程小鼠资源库（NRCMM）暨南京大学模式动物研究所（MARC）是中国最大的遗传工程小鼠资源库。 除了拥有500多种小鼠品系外，我们从2005年开始，对外提供基因工程改造小鼠的定制服务，包括转基因（TG）和敲除/敲入（KO/KI）服务。 其中敲除/敲入服务又包括全身性敲除（Conventional KO）、条件性敲除（Conditional KO）、点突变敲入（Target Mutation KI）以及人源化（Humanised） 小鼠的制作以及更为复杂的多次打靶小鼠的制作。

我们负责打靶基因的文献调研，根据您的需求量身定制所需要的打靶小鼠，并进行相应的评估，最大限度的节约您的时间和降低风险，得到您满意的特制小鼠模型。

我们的流程包括打靶载体设计、ES cells打靶、囊胚注射、小鼠繁育、遗传鉴定以及胚胎冷冻，小鼠定制服务灵活多变，可以随意选择您所需要的服务，您可以自行提供打靶载体（要求见转基因小鼠）以及已经打靶完成的ES cells等，我们可以继续帮您完成后续操作。

定制流程：
1.打靶载体设计
在确定方案后，我们会完成打靶载体的构建
在条件型敲除（Conditional KO）策略中，我们会利用同源重组技术。KO First与Conditional KO有相似之处，KO Firs是在Neomycin标记位置的元件更为复杂，是一个带有剪接受体位点的LacZ和Neomycin的合并体。这样，Neomycin作为筛选标记，功能与上述Conditional KO中一致，LacZ就能够作为reporter在目的基因的promoter启动下，与目的基因一同表达，可以方便地对目的基因的表达进行定位。同样，与Flpe表达品系交配可以删除LacZ-neo标记，转变成常规的Conditional KO的flox小鼠。

基因敲入(Knock In)是指在需要操作区域定制突变或则将外源基因整合进入此区域。例如在需要操作基因区域将一些特定的DNA片段或者某些报告基因(如EGFP、dsRed、LacZ等)通过同源重组的方式整合进入特定的基因区域，使操作基因区域发生突变或者带上某种报告基因的标记，进而对其进行研究。

2.ES cells打靶：
之后我们会完成ES电转和阳性克隆筛选（PCR和Southern筛选），目前我们可以提供的ES细胞背景为C57BL/6或129S6，如果有特殊背景需要，请联系询问。

3.囊胚注射：
打靶之后完成显微囊胚注射

4.遗传鉴定：
最后对得到的小鼠进行鉴定，得到阳性嵌合小鼠，对阳性小鼠进行可遗传性检测，得到杂合子小鼠，最终向客户提供至少4只基因敲除的F1杂合子小鼠。

5.胚胎冷冻：
我们将为您提供两年的此小鼠免费胚胎冷冻服务，随时为您提供此小鼠活体，不必担心您宝贵小鼠模型的丢失，以保证您能顺利进行实验。