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上海益启生物科技有限公司
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100MG
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文献和实验检测时,其灵敏度和定量与荧光基质底物4-MU(四甲基伞形酮)相关。 2 应用原理 4-MU酯类只有裂解之后才能产生荧光。进行荧光素酶检测主要基于以下原理:首先要水解含有4-MU的底物,比如β-葡萄糖醛酸酶水解β-4-MU-葡萄糖醛酸或β-Gal水解β-4-MU-半乳糖。β-Gal水解4-MU-β-D-半乳糖产生的荧光分子4-MU,在365nm激发时能在460nm处产生发射光。 Turner BioSystems
。 有些核酸中还含有修饰碱基(modifiedcomponent),(或稀有碱基,unusualcomponent),这些碱基大多是在上述嘌呤或嘧啶碱的不同部位甲基化(methylation)或进行其它的化学修饰而形成的衍生物。一般这些碱基在核酸中的含量稀少,在各种类型核酸中的分布也不均一。DNA中的修饰碱基主要见于噬菌体DNA,如5-甲基胞嘧啶(m5C),5-羟甲基胞嘧啶hm5C;RNA中以tRNA含修饰碱基最多,如1-甲基腺嘌呤(m1A),2,2一二甲基鸟嘌呤(m22G)和5,6-二氢
A珠子 8. (Bradford 法)做蛋白标准曲线,测定蛋白浓度,测前将总蛋白至少稀释1:10倍以上,以减少细胞裂解液中去垢剂的影响(定量,分装后,可以在-20℃保存一个月) 9. 用PBS将总蛋白稀释到约1 μg/μl,以降低裂解液中去垢剂的浓度,如果兴趣蛋白在细胞中含量较低,则总蛋白浓度应该稍高(如10 μg/μl) 10. 加入一定体积的兔抗到500μl总蛋白中,抗体的稀释比例因兴趣蛋白在不同细胞系中的多少而异 11. 4℃缓慢摇动抗原抗体混合物过夜或室温2h,激酶或磷酸酯酶活性分析建议
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