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禽流感病毒H5/H7亚型(AIV-H5/H7)核酸检测试剂盒

(双重荧光-PCR法)
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  • HE61501-R
  • 2025年06月28日
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    • 供应商

      上海研生

    • 规格

      50T

    禽流感病毒H5/H7亚型(AIV-H5/H7)核酸检测试剂盒(双重荧光-PCR法)实验外包:
    1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
    2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
    3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
    4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
    5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
    6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
    7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR
    8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
    储存条件:
    14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
    1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
    2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
    3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
    4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
    5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
    产品细节图片1
    使用方法:
    注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
    1.样本处理(样本处理区)
    待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
    2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
    取N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
    组分每头份用量FMD  RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
    1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。 2.加样(样本处理区)
    3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。
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    荧光定量PCR最早称TaqMan PCR,后来也叫Real-Time PCR,是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理:随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。 一般而言,荧光扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段,荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段, PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便,在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念:荧光阈值和 CT值。

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