单增李斯特菌毒力基因核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）

单增李斯特菌毒力基因核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 
    10×PCR buffer 
                  5 μl     dNTP mix （2mM）   
          4 μl     引物1（10pM）   
              2 μl     引物2（10pM） 
                2 μl     Taq酶 （2U/μl）
                1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
  1 μl      加ddH2O至 50 μl
   视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PHC(Human primary hepatic carcinoma) ELISA Kit  人肝癌抗原     96T
Apaf-1(Human apoptosis protease activating factor-1) ELISA Kit  人凋亡蛋白酶激活因子1     96T
TFPI(Mouse Tissue factor pathway inhibitor) ELISA Kit  小鼠组织因子途径抑制物     96T
LPL ELISA Kit  大鼠脂蛋白脂酶     96T
TRA-5b ELISA Kit  大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b     96T
NPC(Human nasopharyngeal carcinoma) ELISA Kit  人鼻咽癌     96T
AQP-5(Mouse Aquaporin 5) ELISA Kit  小鼠水通道蛋白5     96T
GIP ELISA Kit  大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽     96T
UBC(Human urinary bladder cancer antigen) ELISA Kit  人膀胱癌抗原     96T
AQP-4(Mouse Aquaporin 4) ELISA Kit  小鼠水通道蛋白4     96T
GP-II ELISA Kit  大鼠糖原磷酸化酶同工酶II     96T
P-CK(Human pan-cytokeratin) ELISA Kit  人广谱细胞角蛋白     96T
AQP-3(Mouse Aquaporin 3) ELISA Kit  小鼠水通道蛋白3     96T
AQP-1(Mouse Aquaporin 1) ELISA Kit  小鼠水通道蛋白1     96T
GP-MM ELISA Kit  大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM     96T
Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA Kit  人癌基因蛋白质p190/bcr-abl     96T
GP-BB ELISA Kit  大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB     96T
BTA(Human Bladder tumor antigen) ELISA Kit  人膀胱肿瘤抗原     96T
AQP-0(Mouse Aquaporin 0) ELISA Kit  小鼠水通道蛋白0     96T
AQP-2(Mouse Aquaporin 2) ELISA Kit  小鼠水通道蛋白2     96T
MK(Human Midkine) ELISA Kit  人中期因子     96T
TAb ELISA Kit  大鼠甲状腺素抗体     96T
Bid(Human BH3 interacting domain death agonist) ELISA Kit  人BH3结构域凋亡诱导蛋白     96T
TRAb ELISA Kit  大鼠抗促甲状腺素受体抗体     96T
TG(Mouse Thyroglobulin) ELISA Kit  小鼠甲状腺球蛋白     96T
INH-A(Mouse Inhibin) ELISA Kit  小鼠抑制素A     96T
CA ELISA Kit  大鼠儿茶酚胺     96T
Bcl-2(Human B-cell leukemia/lymphoma 2) ELISA Kit  人B细胞淋巴瘤因子2     96T
Beta-CG(Mouse Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit  小鼠绒毛膜促性腺激素β     96T
TSGF(Human Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor) ELISA Kit  人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子     96T
IL-27 ELISA Kit  大鼠白介素27     96T
单增李斯特菌毒力基因核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）IL-33 ELISA Kit (human)  人白介素23     96T
SHBG(Mouse sex hormone-binding globulin) ELISA Kit  小鼠性激素结合球蛋白     96T
PEDF(Human pigment epithelium-derived factor) ELISA Kit  人色素上皮衍生因子     96T
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产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的： 1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性极好，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。 2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。 外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性定量方法，已得到全世界的公认，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。 b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。