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- 2025年06月28日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
‘-20℃保存
- 保质期：
有效期一年
- 库存：
30
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 规格：
50次
| 编号 | 成分 | 十孔盒包装（去纸托） |
| 试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL（亮黄盖） |
| 试剂二 | 成分 PCR 引物混合液 | 100 uL（白盖） |
| 试剂三 | 成分 PCR 阳性对照 | 50 uL（黄盖） |
| 试剂四 | 超纯水 | 1 mL（本色盖） |
| 试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次（成分见下） |
| 试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL（白盖） |
| 试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL（绿盖） |
| 试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL（红盖） |
| 试剂九 | 使用手册 | 1 份 |
简并性引物对PCR扩增有无影响?
有影响。简并数量应尽量少。
通常一条引物中简并的碱基不要超过4处，如果简并的碱基数过多，则会造成反应体系中有效引物的量相对减少，此时应适当增加引物的使用量。但引物量过大，容易引起非特异扩增，应加以注意。
适合的模板添加量是多少?
根据基因组DNA、质粒DNA及反转录产物等模板种类不同，PCR反应的适合模板添加量也不同。 特别是使用PrimeSTAR® HS DNA Polymerase时，过剩的模板量有时会对PCR扩增产生阻害作用。 另外，使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时，根据模板种类、模板使用量及模板质量可调整PCR反应条件。
使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时，模板可按以下推荐量添加（50 μl反应体系）：
· Human genomic DNA：5～200 ng
· E.coli genomic DNA: 100 pg～100 ng
· cDNA Library：1～200 ng
· λDNA：10 pg～10 ng
· 质粒DNA：10 pg～1 ng
PCR产物 (3‘端附有A碱基时) 经末端平滑后，克隆于去磷酸的平滑末端载体时，其PCR产物需不需要5′末端磷酸化?
需要。一般的PCR用引物5′末端都不带磷 (除非在引物合成时已特别标记)。使用这种引物进行PCR的PCR产物经末端平滑化后，与去磷酸的平滑末端载体连接之前，PCR产物必须进行5′末端磷酸化。
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文献和实验可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。 嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离
实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准
过程，无RNA损失。这就需要裂解液即可迅速裂解细胞，高效的保护RNA，又不会影响高效反转录反应，且对于后续荧光定量PCR无抑制作用。FastLine细胞到cDNA快速制备试剂盒（KR105，TIANGEN），一站式完成从细胞到cDNA的快速制备，同时去除基因组DNA残留，整个操作流程仅需50 min，获得的cDNA不但可以直接进行荧光定量 PCR还可以和正常提取RNA后进行第一链反转录后得到的cDNA一样，冷冻保存供以后使用，是从少量细胞快速制备cDNA的最佳选择，并可实现高通量检测。 图
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