粪肠球菌PCR试剂盒

产品简介：
粪肠球菌（Enterococcus faecalis）是革兰氏阳性，过氧化氢阴性球菌， 是人和动物肠道内主要菌群之一，其能产生天然抗生素，有利于机体健康；同 时还能产生细菌素等抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长，改 善肠道微环境；还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，减少肠道尿素 酶和内毒素的含量，使血液中氨和内毒素的含量下降。粪肠球菌作为一种益生 菌，在医学和食品工程领域得到广泛应用。另外，肠球菌为消化道内正常存在 的一类微生物，在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力，并且是一种兼性厌氧的 乳酸菌，与厌氧、培养保存条件苛刻的双歧杆菌相比，更适合于生产和应用。 本产品是根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增粪肠球菌，与其他微生物没有交叉
反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。


规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
粪肠球菌PCR 引物混合液	13-62020yw	100 μL（白盖）
粪肠球菌PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-62020pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-62020sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装，其使用 手册可以从本公司网站天净沙核酸释放剂或产品编号 61202 下载。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要 求的样品起始量）中加 10μL 粪肠球菌 PCR 阳性对照的 1 万倍稀释液而得， 样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待 用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
粪肠球菌PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（粪肠球菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物阳性对照必须有条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。