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总胆固醇(TC)含量检测试剂盒

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  • HEPENGBIO
  • YX-C-B409
  • 上海
  • 2025年11月10日
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      50T/48S

    • 保质期

      6个月

    • 供应商

      赫澎生物

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      50T/48S

    总胆固醇(TC)含量检测试剂盒说明书
     

    注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

    货号:YX-C-B409
    规格:50T/48S 产品简介:
     

    可见分光光度法

     
    总胆固醇(Total CholesterolTC)是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和,包括游离胆固醇和胆固醇酯。
    利用酯酶催化胆固醇酯水解游离胆固醇FC)和游离脂肪酸(FFA,从而把胆固醇酯转化FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化 FC 氧化,4-胆甾烯酮和 H2O2;后利用过氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚,红色醌类化合物,其在 500nm 有特征吸收峰,其颜色深浅与TC 含量成正比。

    试验中所需的仪器和试剂

    可见分光光度计、天平、低温台式离心机、玻璃比色皿、可调式移液枪、
    EP 管、蒸馏水、异丙醇。产品内容:
    提取液:异丙醇 50mL×1 瓶,自备,4℃保存;
    工作液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
    标准品:粉剂×1支,10mg胆固醇,4℃保存。临用前加入517μL提取液,振荡溶解,即为50μmol/mL 的胆固醇标准溶液。

    操作步骤:

    一、样本处理:
    1. 组织:按照组织质量g:提取液体积(mL)15~10 的比例建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
    提取液)进行冰浴匀浆。10000g4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
    1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 :提取液体积(mL500~10001 的比例建议 500 细胞加入 1mL 提取液,冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 2 秒,间隔 3 秒,总时间 3min然后 10000g4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。
    2. 血清(浆)样品:直接测定。二、测定步骤:
    1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。
    2、 将 50μmol/mL 标准液用提取液稀释为 2.51.250.6250.31250.156250.078μmol/mL 的标准溶液备用。
    3、 操作表:(在离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂)





    第 1 页 共 2
     
      测定管 标准管 空白管
    样品(µL 100 - -
    标准溶液(μL - 100 -
    提取液(μL - - 100
    工作液(µL 900 900 900
    充分混匀,37℃静置 15min,反应完成后测定 500nm 处吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 标准管和 A 空白管,A=A 测定管-A 空白管,A 标准=A 标准管-A 空白管, 空白管只需测一次。
    总胆固醇含量计算
    一、标准曲线的绘制:
    以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的A 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+bA 带入方程得到 xμmol/mL
    二、总胆固醇含量的计算:
    1. 血清(浆)FC 含量计算:
    TC 含量(μmol/dL=x×100
    1. 组织中 FC 含量计算:
    1. 按样本蛋白浓度计算
    TC 含量(μmol/mg prot=x×V 提取÷Cpr×V 提取)=x÷Cpr
    1. 按样本鲜重计算
    TC 含量(μmol/g 鲜重)=x×V 提取÷W= x÷W
    1. 细胞、细菌中 TC 含量计算:
    TC 含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x
    1001dL=100mLV 提取:加入样本的提取液体积,1mLW:样本质量,g500:500 万个细胞数量。

    注意事项

    A 大于 1.5 时,建议将样本用提取液稀释后再进行测定。
     

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