- ￥2990
- YBio/钰博生物
- YB788000-14
- 中国
- 2025年07月14日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Rabies Virus SYBR qRT-PCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Rabies Virus SYBR qRT-PCR Kit
低温运输，-20℃保存
狂犬病病毒（Rabies Virus, RV）属于弹状病毒科狂犬病毒属，为 RNA 病毒，它
是引起狂犬病的病原体。狂犬病毒会引发狂犬病，属于人畜共患的传染病，由于该病毒
能对人体健康造成严重损害，因此快速检测狂犬病病毒具有重要意义。本试剂盒根据
RT-PCR 原理开发，具有下列特点：
1. 使用本公司开发的一管式荧光定量 RT-PCR试剂盒，灵敏度比常规 RT-PCR高2-3
个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
2. 封闭式，避免扩张产物对后续实验的污染。
3. 根据狂犬病病毒的保守序列设计的专一性 RT-PCR 引物，与相关病毒无交叉反应。
4. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 RT-PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分：
| 成分 | 编号 | 小纸盒包装 |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 试剂一 | 500 μL（棕色管） |
| 10×qRT-PCR 酶混合液 | 试剂二 | 100 μL（红盖） |
ROX 染料 I，50× |
试剂三 | 20 μL（棕色管） |
| ROX 染料 II，50× | 试剂四 | 20 μL（棕色管） |
| 荧光 PCR 专用模板稀释液 | 试剂五 | 1mL（黄盖） |
| 狂犬病病毒通用染料法 qRT-PCR 引物混合液 | 试剂六 | 100 μL（白盖） |
| 狂犬病病毒通用染料法 qRT-PCR阳性对照（1×10E8拷贝/μL） | 试剂七 | 50μL（紫盖） |
| RNA 病毒裂解液（试用装） | 试剂八 | 15 次（9 mL） |
| 使用手册 | 一份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。阳性对照需要因易污染其他成分需要单独放置。本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供 RNA 片段作为阳性对照。
自备试剂：样品 RNA。
使用方法：一、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。）
1. 注意：本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的核酸片段作为阳
性对照。下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的
其他成分。
2. 标记 6 个 RNase-free 离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯 RNase-free 枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得
1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，
充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震
荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品 RNA 的制备
8. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），
一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 上步制备的阳性对照梯度稀释液
中的第 4 号（浓度为 1×10E4 copy/μL，10μL 相当于 1 万拷贝）或第 5 号（浓
度为 1×10E5 copy/μL，10μL 相当于 10 万拷贝）再加上一定量的水作为制备
的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要
求）。可以用水作为制备的阴性对照。
9. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试
剂盒兼容。
三、设置 RT-PCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个
样品，1 个用于 RT-PCR 阴性对照，6 个用于 RT-PCR 阳性对照）。如果做 2-3
次重复，则反应设置数量相应增加。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕
后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加）：
| 成分 | N+2 个制备 所得样品 |
RT-PCR 阴性对照 |
RT-PCR 阳性 对照（2-7 管） |
| 2×qRT-PCR 缓冲液 | 10μL | 10μL | 各 10μL |
| 狂犬病病毒RT-PCR引物混合液 | 2μL | 2μL | 各 2μL |
| 50×ROX (见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各 0.4μL |
| 样品制备所得 RNA 模板（来于第 8 步） | 5.6μL | - | - |
| 稀释所得 6 个阳性对照 （来于第 6 步） |
- | - | 各 5.6μL（2 号样到 2 号管， 3 号样到 3 号管…） |
| 10×qRT-PCR 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
注:需使用 ROX 染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。
需使用 ROX 染料 II 的机型：：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的 Chromo4、Opticon（II）Corbett Rotor Gene 3000。不需要使用 ROX 的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System，LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene3000、RotorGene 6000。
- 上机后按下面参数进行 RT-PCR（参数可能会因仪器不同而需优化）。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| RT（逆转录） | 50℃ | 15-30 分钟 |
| 预变性 | 94℃ | 5 分钟 |
| RT-PCR反应（40个循环） | 94℃ | 20 秒 |
| 62℃ | 20 秒（采集SYBR通道的荧光信号） | |
| 72℃ | 20 秒 | |
| 按仪器预设程序进行熔解曲线分析 | ||
13. 如果 PCR 阳性对照和 PCR 阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，则说明 PCR 有
效，可以进行后续分析。以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制
标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，
再推算出其浓度。
14. 如果 PCR 阳性对照或 PCR 阴性对照任何一个没有得到预期阳性和阴性结果（如
PCR 阳性对照没有扩增，或阴性对照出现扩增），则说明 PCR 实验无效或污染，
不需要进行后续分析，需要重复 PCR 或请跟厂家联系。
15. 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照均得到预期阳性和阴性结果，说明样品
制备操作有效，实验结果有效。
16. 如果样品制备阳性对照或样品制备阴性对照任何一个没有得到预期结果（如样品制
备阳性对照无扩增，或样品制备阴性对照有扩增），说明样品制备操作无效或有污
染，实验结果无效，需要重复样品制备过程或请跟厂家联系。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验实时荧光定量 PCR 技术（Quantitative Real-time PCR，简称 qPCR）是在 PCR 扩增过程中，通过实时监测荧光信号的变化，达到对待检测样本中初始模板定量分析的方法。当前 qPCR 技术被广泛应用于临床疾病诊断，动物疾病监测，食品安全分析等领域。随着 2020 年新冠疫情在全球的蔓延，qPCR 技术更是因其检测通量高，速度快，操作简便等优势成为新冠病毒核酸检测的有效方法被众人所熟知。 那么为了得到可靠、准确的检测结果，我们需要注意哪些方面呢？其实决定一次实验成功
定量的方法。 实时荧光定量 PCR 是目前确定样品中 DNA(或 cDNA) 拷贝数最敏感、最准确的方法。如果用于 RNA 检测，这被称为逆转录实时 PCR 即（Real-time RT-PCR）是实时 PCR 法，它是指对 DNA 或经过反转录（RT-PCR）的 RNA 通过聚合酶链式反应并实时监测 DNA 的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异 DNA（RNA）起始量存在相关性，从而实现定量检测。 RealTime PCR 的基本目标是精确
可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。 嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
