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即用型ABTS溶液是美国AAT Bioquest生产的ELISA检测试剂,辣根过氧化物酶(HRP)和HRP缀合物在过氧化氢存在下促进ABTS氧化,将ABTS转化为其蓝绿色氧化产物。该显色反应广泛用于ELISA测定中的HRP定量。氧化的ABTS产物具有420nm的最大吸收,可以用分光光度计容易地跟踪。ReadiUse™ABTS解决方案针对在微孔板或试管中使用HRP或HRP标记的缀合物和过氧化氢的ELISA测定进行了优化。我们的ABTS解决方案可以在一次添加中完成HRP反应。在过氧化氢存在下,当与HRP或HRP缀合物反应时,测定溶液将其颜色改变为浅绿色。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的即用型ABTS溶液。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收: | 420nm |
| 推荐孔板: | 纯白色 |
产品说明书
样品实验方案
1.在HRP标记的试剂温育后洗涤测定板。2.每孔加入100μLReadiUse ABTS溶液。
3.将板在室温下孵育15-30分钟。注意:孵育时间取决于测定条件。
4.用ELISA酶标仪测量415±10 nm(最大420 nm)的吸光度信号。注意:如果需要,可以通过向0.1M柠檬酸中加入等体积的1%SDS来终止反应。
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文献和实验问:有没有做辣根过氧化物标记的朋友啊,能不能把你们的步骤发给我。本人开始做,发现很多人用的浓度都不一样。答:1.1 试剂准备1) 10mg/mL HRP2) 0.06mol/L NaIO43) 0.16mol/L乙二醇4) 碳酸盐缓冲液(Na2CO3 0.7952g NaHCO3 1.4702g 溶于500mL蒸馏水中,调pH值到9.5)5) 2.5mg/mL NaBH46) 0.01mol/L磷酸盐缓冲液,pH7.41.2 操作步骤1. 10mg/mL取HRP VmL,溶液为棕黄色,加入
一、戊二醛二步法1. 原理戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤(1)称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。(2)反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟,收集棕色流出液。如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌。(3)将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中。(4)用1M
酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 1. 原理:戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。 2. 标记步骤: (1) 称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。 (2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制
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