荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 *红色荧光*

Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

货号	11301	存储条件	f/l
规格	200 Tests
Ex (nm)	570	Em (nm)	583
分子量		溶剂

 

产品优势  

1.操作便捷：支持96孔或384孔微孔板检测模式，无需分离步骤即可轻松实现自动化操作；

2.双信号检测：采用Amplite® Red底物，既可通过荧光酶标仪（激发/发射波长：571/585 nm）也可通过吸光度酶标仪进行检测；

3.超高灵敏度：在100 µL反应体系中可检测低至0.1 mU/ml的MPO活性；

4.高通量适配：特别适合用于MPO抑制剂的高通量筛选研究。

 

适用范围

用于检测 MPO活性。

 

产品介绍

髓过氧化物酶(MPO)是一种主要存在于中性粒细胞和单核细胞中的绿色血红素蛋白，具有过氧化物酶活性。它能催化过氧化氢与卤素离子反应，生成具有细胞毒性的酸类及其他中间产物，在机体氧依赖性杀伤肿瘤细胞和微生物过程中起重要作用。MPO缺乏症是一种遗传性酶缺陷疾病，可导致免疫功能低下。目前，治疗性MPO抑制剂的研发备受关注。

Amplite®髓过氧化物酶检测试剂盒提供了一种快速、灵敏的MPO检测方案，适用于溶液和细胞裂解液样本。该试剂盒支持96孔或384

孔微孔板检测，无需分离步骤即可实现自动化操作；采用Amplite® Red底物，可通过荧光酶标仪(Ex/Em=571/585 nm)或吸光度酶标仪进行双模式检测。在100μL反应体系中，最低可检测0.1 mU/ml的MPO活性，非常适合用于MPO抑制剂的高通量筛选。

注：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.MPO标准品或测试样品（50μL）
2.添加MPO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

1.2 H2O2储备溶液（500X，10 mM）：
将10μL的3％H₂O₂（0.88M，组分C）加入870μL的测定缓冲液（组分B）中。注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

1.3 髓过氧化物酶（MPO）标准溶液（200 mU / mL）：
将50μL测定缓冲液（组分B）加入到髓过氧化物酶标准品（组分D）的小瓶中。注意：一个小瓶含有约5 - 10 mU的髓过氧化物酶。

2. HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶标准溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液加入葡萄糖氧化酶小瓶（组分D）中。

4.葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

 

2.标准溶液

MPO标准
将20μL200mU / mL MPO标准溶液加入380μL测定缓冲液（组分B）中，得到10 mU / mL MPO标准溶液（MPO7）。 取10 mU / mL MPO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的系列稀释MPO标准品（MPO6 - MPO1）。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite 红色储备液（250X）和10μLH2O2（500X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.03mL MPO工作溶液。 避光。

 

样品分析

表1. 96孔固体黑色微孔板中MPO标准品和测试样品的布局。 MPO =髓过氧化物酶标准品（MPO1-MPO7,0.01至10mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
MPO1	MPO1	...	...
MPO2	MPO2	...	...
MPO3	MPO3
MPO4	MPO4
MPO5	MPO5
MPO6	MPO6
MPO7	MPO7

表2.每个孔的试剂组成。 注意，由于Amplite Red底物（非荧光产物）的过度氧化，高浓度的MPO可能导致荧光信号降低。

孔	容积	试剂
MPO1-MPO7	50ul	连续稀释（0.01至10 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备髓过氧化物酶标准品（MPO），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向髓过氧化物酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMPO工作溶液，使总MPO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLMPO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光强度。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。