梅迪-维斯纳病病毒PCR试剂盒

产品简介：
梅迪-维斯纳病病毒( Maedi-Visna Virus)是一种 DNA 病毒，会引起梅迪维斯纳病，是一种慢性病毒性传染病。其主要特征是成年山羊呈缓慢发展的关节炎，间或伴有间质性肺炎和间质性乳房炎；2-6 月龄羔羊表现为上行性麻痹的神经症状，对养羊业造成严重损害，因此梅迪-维斯纳病病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品基于 PCR 原理开发，具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增梅迪-维斯纳病病毒，与其他病毒没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品参考国家出入境检验检疫行业标准 SN/T1171-2011 开发，只能用
于科研。


规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（蓝色）
梅迪-维斯纳病病毒PCR 引物混合液	13-21700yw	100 μL（白盖）
梅迪-维斯纳病病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-21700pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-21700sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 15 次天净沙核酸释放剂试用装，其 使用手册可以从本公司网站天净沙核酸释放剂或产品编号 61202 下载。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在 200μL 水中加 10μL 梅 迪-维斯纳病病毒 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液而得，样品制备阴性对 照是直接用 200μL 水。提取结束后最后得到的模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
梅迪-维斯纳病病毒PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（梅迪-维斯纳病病毒PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	10 sec
最后延伸	72℃	10  min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 290bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。