蜂房蜜蜂球菌（欧洲蜂幼虫腐臭病）PCR试剂盒

产品简介：
蜂房蜜蜂球菌（Melissococcus pluton）是引起欧洲幼虫腐臭病（European foulbrood，简称 EFB）的病原菌，该菌单个的形态为披针形，常结成链状或 成簇排列，直径 0.5μm~1.0μm，是一种革兰氏阳性菌，但有染色特性不稳定 性，有时候可能为革兰氏阴性菌，兼性厌氧。由于欧洲幼虫腐臭病是急性、毁 灭性传染病，能导致蜜蜂幼虫的大批死亡，最终导致整个蜂群的灭亡，危害巨 大，其中中蜂发病比意蜂更严重，我国也是主要的疫区之一。该病具有传播迅 速、发病快的特点，是蜜蜂的主要病害。农业部和质检总局联合制定的新的 《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》将其列为二类传染病。世界动物卫 生组织（OIE）也将其列为检疫对象，因此蜂房蜜蜂球菌快速检测具有重要的意 义。本试剂盒就是为此目得根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增蜂房蜜蜂球菌，但跟其他微生物无交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
蜂房蜜蜂球菌PCR 引物混合液	13-68000yw	100 μL（白盖）
蜂房蜜蜂球菌PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-68000pc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-68000sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 100 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
蜂房蜜蜂球菌PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（超纯水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（蜂房蜜蜂球菌PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	94℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 829 bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。