人支原体PCR试剂盒

产品简介：
支原体（mycoplasma）是 1898 年 Nocard 等发现的一种类似细菌但不具 有胞壁的原核微生物，能在无生命的人工培养基上生长繁殖，直径 50-300nm， 能通过细菌滤器。又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物，支原 体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只 有核糖体)。基因组多为双链 DNA，散布于整个细胞内没有形成的核区或拟核。 与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两种，约有 20-30%的非淋菌性尿道炎的病人，是由以上两种支原体引起的，是非淋菌性 尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。因此对支原体进行快速灵敏的诊断具有重要 的意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的产品，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增支原体 DNA，但跟其他微生物无交
叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
支原体PCR 引物混合液	13-74110yw	100 μL（白盖）
支原体PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-74110pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-74110sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的 10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒 兼容。也可以选购本公司的 DNAout 或柱式 DNAout。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂，本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
支原体PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（超纯水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（支原体PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 442bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。