丝状支原体山羊亚种PCR试剂盒

产品简介：
羊传染性胸膜肺炎又称羊支原体性肺炎，是由支原体所引起的一种高度接 触性传染病，其临床特征为高热，咳嗽，胸和胸膜发生浆液性和纤维素性炎症， 取急性和慢性经过，病死率很高。引起山羊传染性胸膜肺炎的病原体为丝状支 原体山羊亚种，为细小、多变性的微生物，革兰氏染色阴性。在自然条件下， 丝状支原体山羊亚种只感染山羊，3 岁以下的山羊最易感染，而绵羊肺炎支原 体则可感染山羊和绵羊。本病常呈地方流行性，接触传染性很强，主要通过空 气-飞沫经呼吸道传染。阴雨连绵，寒冷潮湿，羊群密集、拥挤等因素，有利于 空气-飞沫传染的发生；多发生在山区和草原，主要见于冬季和早春枯草季节， 羊只营养缺乏，容易受寒感冒，因而机体抵抗力降低，较易发病，发病后病死 率也较高。本产品是根据 PCR 原理开发检测丝状支原体山羊亚种的试剂盒，它 具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增丝状支原体山羊亚种，与其他微生
物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
丝状支原体山羊亚种PCR 引物混合液	13-74160yw	100 μL（白盖）
丝状支原体山羊亚种PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-74160pc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-74160sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是丝状支原体山羊亚种 PCR 阳 性对照的 1000 倍稀释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最 后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
丝状支原体山羊亚种PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（（超纯水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（丝状支原体山羊亚种PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	57℃	15 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物 阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑 制剂的感染。