丝状支原体丝状亚种SC型PCR试剂盒

产品简介：
丝状支原体丝状亚种 SC 型（Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC）只感染牛属反刍动物，即主要是牛、瘤牛和牦牛，会引起牛传染性胸膜肺 炎，是一种高度接触性传染病，以渗出性纤维素性肺炎和浆液纤维素性胸膜肺 炎为特征。初期病变以小叶性支气管肺炎为特征。肺炎灶充血、水肿，呈鲜红 色或紫红色。中期呈浆液性纤维素性胸膜肺炎，病肺肿大、增重，灰白色，多 为一侧性，以右侧较多，多发生在膈叶，也有在心叶或尖叶者。该疾病往往会 给养殖业带来较大的经济损失，因此丝状支原体丝状亚种 SC 型的检测具有重 要的意义。本试剂盒是根据 PCR 原理开发，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供细菌 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增丝状支原体丝状亚种 SC 型。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品参考国标 GB/T18649-2014 开发，只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
丝状支原体丝状亚种SC型PCR 引物混合液	13-74150yw	100 μL（白盖）
丝状支原体丝状亚种SC型PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-74150pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-74150sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL 阳性对照的10000 倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作 为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA 提取试 剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout 或柱式细菌 DNAout。本试 剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂，本产品的裂解液可 以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
丝状支原体丝状亚种SC型PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（丝状支原体丝状亚种SC型PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	94℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	10 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 277bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。