转基因元件tml3终止子PCR试剂盒

转基因元件tml3终止子PCR试剂盒产品特点:
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。 ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 ?g RNA/ml。样品RNA浓度(?g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 ?g/ml。
样品cDNA合成:
①反应体系
序号  反应物  剂量 1  逆转录buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆转录酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  总体积  10μl
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。

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kelch样蛋白9抗体    KL ELISA Kit    Klotho蛋白(KL)ELISA试剂盒
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BTB-kelch蛋白家族4抗体    JAK2 ELISA Kit    Janus激酶2(JAK2)ELISA试剂盒
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Kelch样蛋白25抗体    JAG1 ELISA Kit    Jagged1蛋白(JAG1)ELISA试剂盒
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肾病样蛋白1抗体    INVS ELISA Kit    Inversin蛋白(INVS)ELISA试剂盒
组蛋白H3K9甲基转移酶4抗体    ITSN2 ELISA Kit    Intersectin2蛋白(ITSN2)ELISA试剂盒
钾离子通道蛋白家族成员3抗体    ITSN1 ELISA Kit    Intersectin1蛋白(ITSN1)ELISA试剂盒
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20号染色体开放阅读框19抗体    FcγRⅠ ELISA Kit    IgG-Fc片段受体Ⅰ(FcγRⅠ)ELISA试剂盒
细胞角膜蛋白多糖抗体    FcγBP ELISA Kit    IgG-Fc片段结合蛋白(FcγBP)ELISA试剂盒
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激肽释放酶3/舒血管素3抗体    FcγR3A ELISA Kit    IgG-Fc片段低亲和力受体Ⅲa(FcγR3A)ELISA试剂盒
上皮锌指蛋白1, 2, 4抗体    FcεRⅠ ELISA Kit    IgE-Fc受体Ⅰ(FcεRⅠ)ELISA试剂盒
肠道内富含的Kruppel样因子/上皮锌指蛋白4抗体    FcεRⅡ ELISA Kit    IgE-Fc片段受体Ⅱ(FcεRⅡ)ELISA试剂盒
Ras信号转导KSR1蛋白抗体    FcaR ELISA Kit    IgA-Fc断片受体(FcaR)ELISA试剂盒
血蓝蛋白抗体    HCC ELISA Kit    Hyccin蛋白(HCC)ELISA试剂盒
实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。 ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。