BSA定量检测试剂盒

BSA定量检测试剂盒

TD-BK401

 

 1、试剂盒简介

此定量检测牛血清白蛋白 (BSA) 酶联免疫试剂盒，采用抗BSA的单克隆配对抗体，分别作为包被抗体和检测抗体，组成双抗体夹心ELISA检测试剂盒，并与美国标准局的BSA标准品为参照标准，本试剂盒最低可检测到1ng/mL的BSA。

 

2、试剂盒组分

2.1 抗BSA单克隆抗体包被的96孔板条：                                               1块

2.2 BSA标准品：32 ng/mL、16 ng/mL、8 ng/mL、4 ng/mL、

                            2 ng/mL、1 ng/mL、0 ng/mL                                      各1瓶（0.4 mL/瓶）

2.3 BSA内部参比（20 ng/mL）：                                                          1瓶（0.4 mL/瓶）

2.4 TMB底物显色液：                                                                             1套（A和B各6.5 mL）

2.5 显色底物终止液（2N，H 2SO4）：                                                 1瓶（13 mL）

2.6 样品稀释液                                                                                        1瓶（13 mL）

2.7 洗涤液（10倍浓缩）：                                                                      1瓶（30 mL）

2.8 酶标记抗体稀释液：                                                                          1瓶（13 mL）

2.9 酶标记抗BSA抗体：                                                                          1瓶（0.13 mL）

2.10 使用说明书：                                                                                   1份 

 

3、保存

本试剂盒各组份按标签温度保存，有效期6个月。

 

4、所需仪器

酶标仪（波长450 nm），10 μL、100 μL、1 mL移液器，300 μl多道移液器，移液器吸头、37℃恒温水浴箱。

 

5、操作步骤

5.1将浓缩洗涤液用蒸馏水做10倍稀释。

5.2取出包被有抗BSA的96孔酶标板在室温放置回温。标准品各浓度做平行两孔，50 μL/孔加入酶标板中。加待检样品、内部参比，各两孔，50 μL/孔。然后将酶标记抗体用酶标抗体稀释液做1:100稀释，加入各反应孔，100 μL/孔（酶标记抗体用多少稀释多少，现用现配）。加样过程须在15 min内完成。

5.3置室温20–24℃避光反应1 h，用洗涤液洗涤四遍，拍干。

5.4用移液器加TMB底物显色液100 μL/孔（使用前A、B液等体积混合并恢复至室温），室温20–24℃避光反应10 min，请勿震荡。

5.5用移液器加终止液100 μL/孔，稍微震荡5s混匀。

5.6在酶标仪450 nm波长处读数。

 

6、注意事项

6.1如样品中BSA含量高于32 ng/mL，可将样品做适当稀释。

6.2样品如为冻干制剂，应用样品稀释液充分溶解混匀。

6.3反应时应将整板放入洁净的密闭空间中，为防止反应孔中落入异物。

6.4洗涤拍干后，应消除各孔内残余的气泡。

6.5开封后，将未使用的板条放回加入干燥剂的密封塑料袋中，置4℃密闭保存。

6.6在操作过程中，所使用的移液器吸头、洗涤机（瓶）、器皿等均应严格避免被有BSA的环境和物品污染。

 

7、结果判定

7.1实验有效参数：

实验结果须满足以下有效参数为成立：0 ng/ml OD值≤0.1； 32 ng/ml OD值≥0.80； 阳性参考18–22 ng/ml； R2≥0.98。

7.2计算：

在EXCEL里面以标准浓度为横坐标，消零OD值为纵坐标作散点图，添加趋势线，再显示曲线方程和R2值，将检测样品OD值消零处理后带入直线方程计算对应的浓度。

 

标准浓度	OD1	OD2	OD3	平均值	消零OD
0	0.069	0.062	0.064	0.065	0
1	0.111	0.109	0.113	0.111	0.046
2	0.13	0.127	0.131	0.129	0.064
4	0.191	0.192	0.193	0.192	0.127
8	0.332	0.319	0.327	0.326	0.261
16	0.583	0.588	0.596	0.589	0.524
32	1.039	1.025	1.054	1.039	0.974

 

 

 

7.3判定：

在标准曲线中，设OD 0–16 ng/mL为区间A；OD 16–32 ng/mL为区间B；大于OD 32 ng/mL为区间C。

7.3.1如测得的OD值小于标准曲线中2 ng/mL对应OD值，则BSA含量测定结果计为小于2 ng/mL。 
7.3.2如不同稀释浓度的样本测得的OD值均位于区间A，则最终结果计算取其最低稀释度的测定值。
7.3.3如不同稀释度的测定值均位于区间B或同时位于区间A和B或同时位于区间B和C，则取其最接近OD 16 ng/mL的测定值。
7.3.4如不同稀释度测定值均位于区间C，则需将样本做进一步稀释测定，使其测定值居2 – 32 ng/mL所对应的OD值区间，计算方法按上述7.3.2 – 4。
7.3.5如高稀释度测得OD高于低稀释度或未稀释的样本OD，则可能是操作失误或样本中BSA含量过高（HOOK效应），需重试或调整稀释度。
7.3.6最终结果要考虑稀释因素（实际BSA含量＝计算值×稀释倍数）。

 

8、本试剂盒技术指标

 

8.1 检测限和定量限   

检测限：零浓度标准品加上两倍的标准差（20个零孔计算值），本试剂盒检测限计算为0.2 ng/mL ( ppb )。定量限为标准曲线检测下限,1 ng/mL。

 

8.2 准确度和精密度

计算批内批间变异系数，在高中低三个浓度（20、10、5）下五个重复检测计算批内变异系数，不同时间重复三次计算批间变异系数，CV%均小于10%。

 

批间				批内
浓度(ng/ml)	SD	回收率%	CV%	浓度(ng/ml)	SD	回收率%	CV%
20	0.06	107.3	5.6	20	0.047	102.6	4.6
10	0.049	105.4	4.7	10	0.022	101.2	2.2
5	0.059	99.66	5.9	5	0.028	97.6	2.9

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

8.3交叉反应

本试剂盒对人血白蛋白，小鼠血清，兔血清，鱼明胶没有交叉反应，而对山羊血清有10%的交叉反应（以相同OD值时BSA和山羊血清的浓度的比值的百分数为准）

 

和BSA没有交叉反应的物质
反应物质	反应浓度
人血白蛋白	10 mg/mL
小鼠血清	10%
兔血清	10%
鱼明胶	1%

 

8.4钩状效应

当样品浓度远高于标准曲线最高浓度的时候，会产生HOOK效应，即反应OD值小于32 ng/mL的BSA时候的浓度，本试剂盒为500 μg/mL以上。