Rag2-KO(Rag2-EGFP)

<p style="white-space: normal; text-align: justify;">重组激活基因(<em>recombination．activating genes，Rags</em>)在V(D)J重组过程中发挥重要作用，V(D)J重组过程中发生的免疫球蛋白(<em>Ig</em>)基因和T细胞受体(<em>TCR</em>)基因的重排和重组是B细胞和T淋巴细胞成熟过程中的必需阶段。</p> <p style="white-space: normal; text-align: justify;">小鼠的两个重组激活基因<em>Rag1</em>和<em>Rag2</em>均位于2号染色体，其编码的Rag1和Rag2蛋白在成熟前T细胞发育成为成熟T细胞以及成熟前B细胞发育成为成熟B细胞的过程中，通过识别<em>Ig</em>或<em>TCR</em>基因，并结合基因片段中的重组信号序列(RSS)，启动V(D)J重组。</p> <p style="white-space: normal; text-align: justify;">Rag1和Rag2在淋巴细胞V(D)J重排过程中缺一不可，任意一个缺失都会导致T、B淋巴细胞发育中断，表现为严重的T／B细胞早期发育阻滞，T细胞停滞在CD3<span style="position: relative; font-size: 12px; line-height: 0; vertical-align: baseline; top: -0.5em;">-</span>CD4<span style="position: relative; font-size: 12px; line-height: 0; vertical-align: baseline; top: -0.5em;"><span style="font-size: 13.3333px;">-</span></span>CD8<span style="position: relative; font-size: 12px; line-height: 0; vertical-align: baseline; top: -0.5em;">+</span>CD25<span style="position: relative; font-size: 12px; line-height: 0; vertical-align: baseline; top: -0.5em;">+</span>阶段，B细胞停滞在B220<span style="position: relative; font-size: 12px; line-height: 0; vertical-align: baseline; top: -0.5em;">-</span>CD43<span style="position: relative; font-size: 12px; line-height: 0; vertical-align: baseline; top: -0.5em;">+</span>IgM<span style="position: relative; font-size: 12px; line-height: 0; vertical-align: baseline; top: -0.5em;">-</span>阶段，进而不能产生成熟的T、B淋巴细胞。因外周血中没有成熟T/B淋巴细胞，导致机体产生与人“重症联合免疫缺陷症”(severe combined immunodeficiency，SCID)类似的症状。</p> <p style="white-space: normal; text-align: justify;"><em>Rag1</em>或者<em>Rag2</em>基因缺陷的小鼠外观发育正常，具有正常生殖能力，但由于不能产生T、B淋巴细胞，无法对异体来源的细胞产生异体排斥，因而可以作为移植瘤模型的载体。</p> <p>采用ES细胞打靶的方式，在Rag2基因ATG位点附近定点敲入loxP-EGFP-PolyA-loxP-Neo-loxP表达框，从而造成Rag2基因沉默。作为Rag2基因敲除小鼠，皮下接种肝癌组织块和肿瘤细胞后能形成肿瘤，并且可以增长。由FACS检测小鼠外周静脉血中的T、B淋巴细胞生成量极低，与Nude小鼠T、B淋巴细胞产生量相当甚至更低，与野生型小鼠相比具有显著性差异；而NK细胞含量并未降低。肿瘤组织HE染色病理切片结果显示Rag1 KI小鼠和Nude小鼠肿瘤切片较为相似。该品系小鼠具有替代Nude，NOD-SCID小鼠作为肿瘤成瘤模型的潜力。<br></p>