上海DSS溃疡性结肠炎模型构建

一、模型基本原理

DSS（葡聚糖硫酸钠）通过多重机制诱导结肠炎，高度模拟人类溃疡性结肠炎（UC）的病理特征：

1. 肠道屏障破坏：DSS直接损伤结肠上皮细胞，降低紧密连接蛋白（如occludin、ZO-1）表达，导致肠道通透性增加。
2. 免疫激活与炎症反应：上调促炎细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β），激活NF-κB和TRPV1等信号通路，并招募炎症细胞浸润。
3. 肠道菌群失调：改变黏液层菌群结构，促进致病菌侵入黏膜，加剧炎症。
4. 分子量依赖性：分子量36,000-50,000的DSS诱导效果最稳定，其他分子量可能导致高死亡率或不可重复性。

二、模型构建步骤

（一）急性结肠炎模型

1. 实验动物：

   • 常用品系：C57BL/6或BALB/c小鼠（6-8周龄，雌性或雄性统一）。
   • 环境要求：SPF级饲养，避免微生物干扰。

2. DSS溶液配制：

   • 浓度：3%-5%（w/v），溶于无菌水或饮用水，经0.22μm滤膜过滤除菌。
   • 给药方式：自由饮用，连续5-7天。

3. 操作流程：

   • Day 1：称重并分组，实验组开始饮用DSS溶液，对照组饮用正常水。
   • Day 3-5：更换新鲜DSS溶液，避免降解影响效果。
   • Day 7-8：终止DSS给药，恢复正常饮水，观察至第8天处死。

（二）慢性结肠炎模型

1. 浓度与周期：

   • DSS浓度：1%-3%（w/v），循环给药（如：给药5天，停药7天，重复2-3个周期）。
   • 总周期：通常持续4-6周，以模拟慢性炎症及纤维化。

2. 关键步骤：

   • 首次给药后，定期监测体重和粪便性状，调整DSS浓度以平衡炎症强度与动物存活率。
   • 慢性模型可能伴随结肠缩短、黏膜纤维化及肿瘤样变。

三、动物选择标准

1. 品系差异：

   • C57BL/6小鼠：对DSS敏感，病变多位于左半结肠，适用于炎症机制研究。
   • BALB/c小鼠：耐受性较强，需较高DSS浓度，适合长期慢性模型。
   • 其他动物：斑马鱼、猪等也可建模，但需调整浓度（如斑马鱼用0.5% DSS）。

2. 年龄与性别：

   • 优选6-8周龄成年鼠，代谢稳定且免疫系统成熟。
   • 性别需一致，避免激素水平干扰。

四、评估指标

1. 疾病活动指数（DAI）：
   • 评分标准（0-4分）：

评分	体重下降	粪便性状	潜血/便血
0	无	正常	阴性
1	1-5%	软便	潜血阳性
2	5-10%	黏液便	明显血便
3	10-20%	稀便	肉眼血便
4	>20%	水样便	严重出血

• 每日记录，DAI≥2分视为建模成功。

 

2. 组织病理学分析：

 

• HE染色评估：
• 急性期：黏膜水肿、隐窝破坏、中性粒细胞浸润。
• 慢性期：隐窝缺失、纤维化、淋巴结增生。
  • 评分标准（0-4分）：
• 溃疡数量、杯状细胞缺失程度、炎症浸润深度。

1. 结肠长度与重量：

   • 急性模型结肠缩短约20%-30%，慢性模型缩短更显著。
   • 结肠重量/长度比值反映水肿和炎症程度。

2. 生化指标：

   • 炎症因子：ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平。
   • 氧化应激：MDA（丙二醛）升高，GSH（谷胱甘肽）下降。
   • 髓过氧化物酶（MPO） ：反映中性粒细胞浸润程度。