上海裸鼠皮下成瘤实验

裸鼠皮下成瘤实验是肿瘤学研究中的核心模型之一，通过将体外培养的肿瘤细胞或组织块移植到免疫缺陷裸鼠皮下，模拟肿瘤生长、转移及治疗响应。以下是基于多篇研究资料的整合分析，涵盖实验流程、优化技巧等关键内容。

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一、实验原理

裸鼠因缺乏功能性T淋巴细胞（胸腺发育不全），免疫排斥反应弱，可支持异种肿瘤移植。通过皮下注射肿瘤细胞悬液或组织块，可在局部形成可监测的肿瘤结节，用于研究肿瘤生物学特性、药物疗效评估及分子机制解析。

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二、实验流程与操作要点

1. 实验动物选择

• 品系与年龄：
  • 常用品系：BALB/c-nu（雌性）、Nude裸鼠、NSG（NOD/SCID/IL2Rγ⁻/⁻）等。
  • 周龄与体重：4-6周龄（体重18-20g），年轻小鼠代谢旺盛，成瘤率更高。
• 饲养环境：SPF（无特定病原体）环境适应至少7天，减少环境压力对成瘤的影响。

2. 肿瘤细胞准备

• 细胞状态：
  • 选择对数生长期细胞（密度80-90%），活力>90%。
  • 消化处理：用0.25%胰酶消化后，PBS清洗2次去除血清残留，避免抑制成瘤。
  • 细胞浓度：1×10⁷~5×10⁷个/mL（常用5×10⁶~1×10⁷个/只），过高易导致坏死，过低成瘤率下降。
• 悬液配制：
  • 可混合基质胶（如Matrigel，1:1比例）提高细胞贴附率和血管生成。
  • 悬液需充分吹散，避免细胞聚集影响存活。

3. 皮下接种操作

• 注射部位：
  • 腋下（血供丰富，便于观察）或背部皮下。
  • 进针深度约1cm，避免悬液渗漏。
• 操作细节：
  • 左手固定裸鼠（拇指和食指捏颈背，小指夹尾），右手持注射器缓慢推注。
  • 注射后旋转针头并缓慢退出，按压针孔防止漏液。
  • 每只裸鼠注射体积100-200μL。

4. 肿瘤监测与数据记录

• 观测频率：
  • 接种后1周开始监测，每2-3天测量肿瘤长径（L）和短径（W）。
  • 体积计算公式：V = π/6 × L × W² 或 V = (L × W²)/2。
• 终止标准：
  • 肿瘤体积≤1000mm³（避免过度生长致小鼠痛苦）。
  • 实验周期通常4-6周。

5. 样本采集与处理

• 取材步骤：
  • 安le死后剥离肿瘤，称重并拍照记录。
  • 分装保存：液氮冻存（蛋白/RNA提取）、福尔马林固定（组织切片）。
• 病理分析：
  • 苏mu精-伊红（H&E）染色评估肿瘤结构。
  • 免疫组化或荧光检测特定蛋白表达。

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三、优化技巧与常见问题

1. 提高成瘤率的技巧

• 细胞活性保障：
  • 缩短消化时间（胰酶作用≤2分钟），冰上操作减缓代谢。
  • 使用新鲜培养基，避免反复冻融细胞。
• 实验条件控制：
  • 注射前禁食4小时，减少小鼠应激。
  • 维持恒定温湿度（25℃, 50-60%湿度）。