嘌呤霉素诱导微小病变型肾病模型

一、模型机制与病理基础

核心作用原理

1. 足细胞靶向损伤
   • 嘌呤霉素氨基核苷（PAN）特异性损伤肾小球脏层上皮细胞（足细胞），导致足突广泛融合（电镜特征），破坏肾小球滤过屏障。
   • 分子机制：

• 激活氧化应激通路，促进自由基产生；
• 上调TRPC6通道表达→打破促凋亡/抗凋亡蛋白平衡→足细胞凋亡；
• 抑制足细胞裂孔隔膜蛋白（nephrin、podocin）表达。

1. 病理进程动态变化

   阶段	时间点	病理特征
   急性期	注射后2-5天	足突融合（电镜），尿蛋白↑
   高峰期	第8-13天	大量蛋白尿（>50 mg/24h）、低白蛋白血症、高胆固醇血症、全身水肿
   恢复期	第15-28天	自限性恢复（单次注射模型），尿蛋白逐渐消退
   慢性转化期	>4周（多次注射）	进展为局灶节段性肾小球硬化（FSGS），伴肾小球硬化和间质纤维化

关键驱动因子：

• 炎症浸润：单核/巨噬细胞聚集，纤维连接蛋白↑；
• 代谢紊乱：血清LDL/胆固醇↑35%；
• 凋亡标志：TRPC6过表达→促凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值失衡。

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二、动物选择与造模方法

物种与品系要求

参数	标准化要求	依据
先选物种	大鼠（雄性）	足细胞敏感性高，病理与人类MCD高度相似
推荐品系	SD大鼠 > Wistar大鼠	SD品系造模成功率＞90%，组间差异小
体重/年龄	100-250 g（性成熟期，3-8周龄）	避免幼鼠（代谢未稳）或老龄鼠（自发肾病干扰）
性别	雄性优先	雌激素可能减缓蛋白尿进展

造模方法分类

方法类型	操作要点	病理特点
单次注射（急性模型）	尾静脉缓慢注射PAN（5分钟以上），剂量150 mg/kg（或130-150 mg/100g）	第8天蛋白尿达峰，15天后自愈
多次注射（慢性模型）	皮下注射15 mg/kg/d × 8-12天	4周后进展为FSGS
替代途径	腹腔注射（125 mg/kg，单次）或颈静脉注射	腹腔注射死亡率较高

关键优化步骤：

1. 麻醉与固定：戊ba比妥钠（30 mg/kg）腹腔麻醉，避免注射挣扎漏液；
2. 禁食管理：注射前禁食8小时（不禁水），提高代谢稳定性；
3. 剂量控制：PAN浓度0.5%（w/v），现配现用。

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三、模型评估体系

核心评价指标与检测方法

评价维度	检测指标	方法	阳性标准
功能学	24h尿蛋白定量	生化分析	＞50 mg/24h（高峰期）
	血清白蛋白	ELISA	↓＞40% vs 对照组
	血清胆固醇	生化分析	↑＞30%
组织病理学	足突融合率	透射电镜	广泛融合（＞80%足细胞）
	肾小球硬化指数	PAS染色	慢性模型＞30%
分子标志物	TRPC6蛋白表达	Western blot	↑＞2倍（第5-8天）
	Nephrin/podocin mRNA	qPCR	↓＞50%
炎症指标	单核细胞浸润密度	CD68免疫组化	间质浸润↑＞40%