裸鼠成瘤模型构建

一、模型选择依据

1. 模型类型与适用场景

模型类型	适用研究	优点	缺点	成瘤率	来源
皮下移植模型	药物筛选、肿瘤增殖观察	操作简单、直观监测、成本低	微环境不真实	85-95%
原位移植模型	转移机制、微环境研究	模拟临床病理过程	技术复杂、需影像监控	90-93%
组织块移植模型	保持肿瘤异质性	更接近原发肿瘤特性	操作耗时、需传代稳定	93%

选择建议：

• 基础药物筛选→皮下模型（操作简易）；
• 转移/侵袭研究→原位模型（如肺、颅内、骨）；
• 保留肿瘤微环境→新鲜组织块移植 。

---

二、标准化操作流程

1. 动物准备

• 品系与饲养：

  • 免疫缺陷鼠：裸鼠（Nu/Nu）、NOD/SCID、NSG小鼠（避免免疫排斥）；
  • 年龄/体重：4-6周龄，体重18-22g（过重易脂肪堆积影响成瘤）；
  • 适应性饲养：SPF环境，恒温（26-27℃）、恒湿（45-50%）下饲养≥1周 。

• 伦理规范：

  • 实验方案需通过动物伦理委员会审批；
  • 假手术组同步处理（不接种肿瘤）。

2. 细胞/组织处理

• 细胞悬液制备：

  • 选择对数生长期细胞（活力＞90%），锥虫蓝染色验证 ；
  • 重悬浓度：

• 皮下接种：1×10⁶ ~ 1×10⁷个细胞/mL（PBS或无血清培养基）；

• 原位接种：1×10⁵ ~ 1×10⁶个细胞/μL（如颅内注射）。

  • 基质胶添加：肺原位接种需与基质胶1:1混合增强粘附 。

• 组织块移植：

  • 手术标本用PBS冲洗，切成1-2mm³碎块；
  • 骨原位移植需20块以上/鼠（成瘤率＞90%）。

3. 接种操作

• 皮下接种：
  • 部位：腋下、腹股沟或背部皮下 ；
  • 方法：

1. 消毒皮肤，捏起皮肤形成皮褶；
2. 25G针头斜刺入皮下，缓慢注入100-200μL细胞悬液；
3. 针头停留10秒防反流 。

• 原位接种（以骨肉瘤为例）：

  1. 麻醉裸鼠（戊ba比妥钠35mg/kg腹腔注射）；
  2. 膝关节前内侧切口，暴露胫骨平台；
  3. 注射器针头钻孔至髓腔（落空感），吸出骨髓液减压；
  4. 植入瘤块，骨蜡封孔，缝合 。

• 颅内接种：

  • 立体定位仪固定头部，矢状缝后0.5mm、中线右2.5mm钻孔；
  • 微量注射器注入2-5μL细胞悬液（速率1μL/min）。

4. 术后管理

• 抗感染：切口涂抹红霉素眼膏 ；
• 镇痛：术后24小时给予布洛芬饮水；
• 监测：每日观察活动度、伤口愈合情况 。

---

三、成瘤监测与验证

1. 生长监测

• 测量频率：接种后每周2次 ；
• 体积计算：V = 0.5 × 长径 × 短径²（mm³）；
• 成像技术：
  • 活体成像（荧光素酶标记细胞）；
  • 小动物MRI/X光（骨破坏评估）。

2. 终点评估

• 成瘤标准：体积≥100mm³时分组给药 ；
• 解剖取样：
  • 剥离瘤体称重，计算抑瘤率（药物实验）；
  • TTC染色测坏死面积 。
• 组织学验证：
  • HE染色（细胞形态）；
  • 免疫组化（Ki-67增殖指数）。

3. 血清学指标

• 骨肉瘤模型检测血清ALP、钙磷水平 。