鲁氏耶尔森菌PCR试剂盒

鲁氏耶尔森菌PCR试剂盒
Yersinia ruckeri
产品简介：
鲁氏耶尔森菌(Yersinia ruckeri)是革兰氏阴性肠杆菌，可感染多种鱼类， 鲑科鱼类影响特别明显， 是造成鲑科鱼类肠炎红嘴病(enteric redmouth diseases，ERM)的主要病原菌。被感染的鱼可以观察到异常的行为变化，包 括在水面附近游动、食欲不振和异常游动(如竖游、旋游、倒游等)；患病鱼还 表现出其他体征如：眼球突出、皮肤变黑、口腔和咽喉及其周围皮下出血、 肛门红肿有异物流出等。鲁氏耶尔森菌侵染初期出现患病典型症状的鱼较少， 感染后短时间内疾病大规模暴发， 死亡严重。本产品是根据 PCR 原理开发 的鲁氏耶尔森菌检测试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩鲁氏耶尔森菌，与其他病原没有交叉
反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
鲁氏耶尔森菌PCR 引物混合液	13-29440yw	100 μL（白盖）
鲁氏耶尔森菌PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	60908-29440pc	50 μL（黄盖）
使用手册	13-29440sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取 试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 鲁氏耶尔森菌 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释 液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放 冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
鲁氏耶尔森菌PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（（水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（鲁氏耶尔森菌PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30sec
	55℃	30sec
	72℃	20sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 192bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。