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- 文献和实验
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- 保存条件:
‘-20℃保存
- 保质期:
有效期一年
- 库存:
30
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 规格:
50次
| 编号 | 成分 | 十孔盒包装(去纸托) |
| 试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黄盖) |
| 试剂二 | 成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白盖) |
| 试剂三 | 成分 PCR 阳性对照 | 50 uL(黄盖) |
| 试剂四 | 超纯水 | 1 mL(本色盖) |
| 试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次(成分见下) |
| 试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL(白盖) |
| 试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL(绿盖) |
| 试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL(红盖) |
| 试剂九 | 使用手册 | 1 份 |
简并性引物对PCR扩增有无影响?
有影响。简并数量应尽量少。
通常一条引物中简并的碱基不要超过4处,如果简并的碱基数过多,则会造成反应体系中有效引物的量相对减少,此时应适当增加引物的使用量。但引物量过大,容易引起非特异扩增,应加以注意。
适合的模板添加量是多少?
根据基因组DNA、质粒DNA及反转录产物等模板种类不同,PCR反应的适合模板添加量也不同。 特别是使用PrimeSTAR® HS DNA Polymerase时,过剩的模板量有时会对PCR扩增产生阻害作用。 另外,使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时,根据模板种类、模板使用量及模板质量可调整PCR反应条件。
使用PrimeSTAR® Max DNA Polymerase时,模板可按以下推荐量添加(50 μl反应体系):
· Human genomic DNA:5~200 ng
· E.coli genomic DNA: 100 pg~100 ng
· cDNA Library:1~200 ng
· λDNA:10 pg~10 ng
· 质粒DNA:10 pg~1 ng
PCR产物 (3‘端附有A碱基时) 经末端平滑后,克隆于去磷酸的平滑末端载体时,其PCR产物需不需要5′末端磷酸化?
需要。一般的PCR用引物5′末端都不带磷 (除非在引物合成时已特别标记)。使用这种引物进行PCR的PCR产物经末端平滑化后,与去磷酸的平滑末端载体连接之前,PCR产物必须进行5′末端磷酸化。
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文献和实验1949年沃克(E.Work)从白喉菌(白喉棒杆菌)的水解物中发现的一种氨基酸。根据调查,除革兰氏阳性球菌及某种链霉菌外,广泛存在于几乎所有的细菌。其含量相当于全细胞干重的0.02—0.2%,在细胞内,存在于可溶性组分及细胞壁组分等处。此外,在结核菌的可溶性蛋白质部分、抗原性脂多糖以及从枯草芽孢杆菌的芽孢提取的细胞外肽中也有所发现。其天然物无光学活性。据证明,它的生物学机能除形成稳定的细胞壁组成成分之外,在某些细菌来说(大肠杆菌、产气杆菌),通过二氨基二庚酸脱羧酶的作用,脱羧后生成赖氨酸
propinquum 丙酸棒杆菌 Corynebacterium pseudodiphtheriticum 假白喉棒杆菌 Corynebacterium pseudotuberculosis 假结核棒杆菌 Corynebacterium renale 牛肾盂炎棒杆菌 Corynebacterium renale group 牛肾盂炎棒杆菌群 Corynebacterium seminale 生殖棒杆菌 Corynebacterium striatum 纹带棒杆菌
。 (一)病原体测定 由于PCR技术的问世,使得病原体检测能够快速而方便的进行。但由于其高灵敏性,实验操作很容易受到污染而出现假阳性。只要有微量病原体存在,PCR扩增即可为阳性结果,但并不能作为诊断依据,只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义,因此结模板定量显得特别重要。常规PCR由于不能定量而限制了其应用,然而,PE公司研制的FQ-PCR技术给解决这一问题提供了可能。目前该技术已经应用于丙肝病毒、人类乳头瘤病毒、结核杆菌和食品中大肠杆菌等许多病原体的检测研究。 Morris等[3]用FQ-PCR
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