亮热厉螨（小蜂螨病）PCR试剂盒

产品简介：
亮热厉螨 (Tropiladaps clareae) 又 叫 小蜂螨 ， 引 起 蜜 蜂 的 蜂 螨 病 （acariasis of bees），可以使蜜蜂的幼虫和蛹严重受害，它不但可以使幼虫大 批死亡，腐烂变黑，而且也可使蛹和新出房的幼虫变得残缺不全，蜂群中可见 子脾上有不少的巢房盖被咬破，有的幼虫未化成蛹就死去，有的化蛹后不能羽 化，有的羽化出房时，翅膀残缺不全，幼蜂发育不良，在巢门前或场地上乱爬。 螨病严重的蜂群，由于新蜂不能产生，成年蜂大批死亡，蜂群迅速削弱、甚至 全群覆灭。因此快速准确诊断亮热厉螨具有重要意义。为此本公司基于 PCR 原 理开发了本产品，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供寄生虫 DNA 模板。
2. 根据亮热厉螨保守序列设计的专一性引物，与其他微生物无交叉反应
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次。
6. 本产品只能用于科研。

规格及成分：

成 份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL（红盖）
超纯水	100935	1 mL（亮黄色）
亮热厉螨PCR 引物混合液	13-76300yw	100 μL（白盖）
亮热厉螨PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL）	13-76300pc	50 μL（黄盖）
天净沙核酸释放剂（试用装）	61202	20 次（1mL、绿盖）
使用手册	13-76300sc	1份

运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次免 DNA 提取的天净沙核酸释放剂， 本产品的裂解液可以直接作为 PCR 模板，省略了 DNA 提取步骤。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
亮热厉螨PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL	-	-
PCR 阴性对照（超纯水）	-	18 μL	-
PCR 阳性对照（亮热厉螨PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）	-	-	18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	15 sec
	55℃	15 sec
	72℃	60 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 220bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。