- ￥2490
- YBio/钰博生物
- YB13-712400y
- 中国
- 2025年07月08日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Adeno-associated Virus(AAV) PCR Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃保存
- 规格：
50次
Adeno-associated Virus(AAV) PCR Kit
腺伴随病毒（adeno associated virus,AAV）属细小病毒科，病毒颗粒直径为 20nm，无包膜，20 面体，为目前动物病毒中最简单的一类单链线状DNA 病毒。人群中，AAV 感染率很高，85%的人呈血清抗体阳性，但是未发现 AAV 引起人体疾病，甚至早年的流行病学研究报告认为，AAV 感染者减少了患癌的危险性。因此快速灵敏检测腺伴随病毒具有重要意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增腺伴随病毒，与其他病毒没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
规格及成分：
| 成 份 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL（红盖） |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL（亮黄色） |
| 腺伴随病毒PCR 引物混合液 | 试剂三 | 100 μL（白盖） |
| 腺伴随病毒PCR 阳性对照（1×10E8 拷贝/μL） | 试剂四 | 50 μL（黄盖） |
| 使用手册 | ZY-99047 | 1份 |
运输及保存：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样本DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是腺伴随病毒PCR 阳性对照的1000 倍稀释液，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：
成分 |
样品管 N+2 个 |
PCR 阴性对照 |
PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 腺伴随病毒PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 阴性对照（水） | - | 18 μL | - |
| PCR 阳性对照（腺伴随病毒PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液） | - |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应 （35 个循环） |
95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。 对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验收集病毒。按步骤1收集细胞并准备病毒上清。通过Western blot和/或PCR鉴定重组腺病毒产生。 4、PCR鉴定重组病毒。取5μl病毒上清加入10μl蛋白酶K，55℃孵育1hr,再煮沸5min，离心后取1-2μl作PCR。 五、重组病毒扩增，纯化 1、75cm2方瓶中接种293细胞，至密度达到90%,加入适量病毒上清感染细胞。3-4d后，细胞几乎变圆，且有一半细胞漂浮，则收集所有细胞。约500g转速离心，弃上清。 2、以灭菌PBS重悬沉淀，反复冻融4次。4℃下7000g离心5min
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作 （细菌内同源重组 AdEasy System ） 一 目的基因的克隆（以 pshuttle-CMV 质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。 4.
minnie_pumc 各位战友，大家好，我想请教个问题，在构建重组腺病毒载体时是不是必须先构进T载体中呢？谢谢！ westernblotx 不是一定非要克隆到T载体，你也可以选择直接进行PCR产物酶切（注意引物设计两端的酶切位点选择和保护碱基），然后连接到你需要的目的骨架上。个人认为，我们用T载体主要是因为它作为中间克隆载体，相对比较容易操作，尽管想起来会觉得多了中间步骤，但是每一步都容易验证（比如克隆的片段需要测序是否正确
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
