腺伴随病毒PCR试剂盒

腺伴随病毒PCR试剂盒

Adeno-associated Virus(AAV)

产品及特点

腺伴随病毒（adeno associated virus,AAV）属细小病毒科，病毒颗粒 直径为 20nm，无包膜，20 面体，为目前动物病毒中简单的一类单链线状 DNA 病毒。人群中，AAV 感染率很高，85%的人呈血清抗体阳性，但是未发 现 AAV 引起人体疾病，甚至早年的流行病学研究报告认为，AAV 感染者减少 了患癌的危险性。因此快速灵敏检测腺伴随病毒具有重要意义。本产品就是为 此目的根据 PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供病毒 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增腺伴随病毒，与其他病毒没有交叉 反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

腺伴随病毒PCR试剂盒规格及成分

 

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	腺伴随病毒 PCR 引物混合物	100 μL（白盖）
试剂四	腺伴随病毒 PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（红盖）
试剂五	天净沙核酸释放剂试用装	20 次（1mL，绿盖）
试剂六	使用手册	1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和 一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要 求的样品起始量）中加 10μL 腺伴随病毒 PCR 阳性对照的 1 万倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放 冰上待用。 二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	样品管 N+2 个	PCR 阴性 对照管	标准曲线 样品管（2-7 管）
PCR MagicMix 3.0	各 20μL	20μL	20 μL
腺伴随病毒 PCR 引物混 合液	各 20μL	2 μL	2 μL
N+2 个待测样品 DNA 模板	各
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（腺伴随病 毒 PCR 阳性对照的 1 万 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5min
PCR 反应 （35个循环）	95℃	15 sec
	72℃	60 sec
	55℃	15 sec
最后延伸	72℃	10 min

 

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产物长度为 136bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩 增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！