- ￥1280 - 4480
- Biothrive
- Myco-qt-20/Myco-qt-50/Myco-qt-100
- 上海
- 2025年10月26日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
10
- 英文名：
Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Contamination
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海觅拓生物科技有限公司
- 保存条件：
-20度
- 规格：
20次/50次/100次
| 规格： | 20次 | 产品价格： | ￥1280.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 50次 | 产品价格： | ￥2480.0 |
| 规格： | 100次 | 产品价格： | ￥4480.0 |
探针法支原体污染实时定量PCR试剂盒
Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Contamination
| 货号 | 规格 |
| Myco-qt-20 | 20次反应 |
| Myco-qt-50 | 50次反应 |
| Myco-qt-100 | 100次反应 |
储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。
商品说明
支原体（Mycoplasma）是一种直径约为0.1-0.3 μm、无细胞壁的原核生物，属于柔膜菌纲(Mollicutes)，常被用作柔膜菌纲的统称。支原体具有变形能力，可透过常见过滤膜（0.22-0.45 μm），因此常规的无菌过滤方法不能将其去除，靶向细胞壁的抗生素也对其无效。由于在光学显微镜下无法判断，细胞培养中的支原体污染是一个令人烦恼的问题。支原体种类繁多，目前已知的污染细胞的支原体有20多种，一般是由试剂和人工操作带入，95%的污染事件是由常见的五种支原体引起；由原代细胞的原始组织带入而形成的污染也有发生，污染的支原体种类分布较为广泛。根据细胞类型、来源和培养方法的不同，文献报道的细胞污染率在15-80%之间，极大影响了下游实验的进行，因此必须使用专门的方法检测这些污染。
传统的培养法操作比较繁琐，需要很长时间（最长需要28天），受操作人员的实验技能影响比较大，并且有些支原体种类不能体外培养。而PCR法可有效克服上述缺点。本试剂盒采用探针法对细胞污染进行PCR检测，使用通用性探针和引物，可识别超过150种支原体。常见的污染类型，如:猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis）、唾液支原体（Mycoplasma salivarium）、口腔支原体（Mycoplasma orale）、精氨酸支原体（Mycoplasma arginini）、莱氏无胆甾原体（Acholeplasma laidlawii）、发酵支原体（Mycoplasma fermentans）和肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae），均可以检出。根据易感程度和与人类的密切程度，选取12种支原体进行验证，灵敏度最高可达到每反应2个基因组，大部分种类灵敏度分布在每反应2-12个基因组，最低的是解脲脲原体，灵敏度为每反应86个基因组。本试剂盒适用于检测欧洲药典要求的所有支原体种类，大部分种类可以达到欧洲药典要求的10 CFU/ml的灵敏度，考虑到支原体培养条件和菌株活性的差异，少数种类的支原体难以判断是否符合这个要求。
试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品。探针在5`-端以FAM修饰，3`-端以MGB修饰。引物具有柔膜菌/支原体特异性，与真核生物无交叉反应，即使与亲缘关系较近的革兰氏阳性菌，如：嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）和肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae），也无交叉反应。DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。
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文献和实验为阴性的细胞） 使用该试剂盒还有一些 ↓ 注意事项 1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书全文。 2 为保证结果可靠性，建议每次实验都有阳性和阴性对照，每个反应各加4μl，阳性对照随试剂盒提供，阴性对照为灭菌ddH2O，需客户自己准备。 3 操作时应尽量少说话，或带口罩，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性。 4 细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响检测结果，如果用户需要进一步提高检测灵敏度，建议用不含双抗
），样本上样量不超过提取试剂盒说明书规定的上限，一般提取的 RNA 质量都是很好的。 ③除此之外，提取的过程中戴一次性干净手套；在单独洁净的区域操作；戴口罩并在操作过程中避免讲话。可有效防止实验者汗液、唾液中的 RNase 污染。 （2）该基因第一次扩增，其 CT 值偏大，而其余基因的 CT 值正常。 这种情况下就需要判定是因为基因的扩增效率低导致的 CT 值偏大，还是基因本身的表达量低造成的 CT 值偏大。 如何判定是因为基因的扩增效率低导致的 CT 值偏大，还是基因本身的表达量低造成的 CT
容器内，辐射后以干粉原型贮藏，不但培养基的纯净性得到保障，而且营养性能较过滤后以水溶液形式保存更稳定，对谷氨酰胺等这类水溶液不稳定者特别合适。 目前，有专门做支原体检测的试剂盒，可以用细胞滴片检测。市场上已有了新一代支原体抗生素M-Plasmocin（InvivoGen公司），能有效的杀灭支原体，又不影响细胞本身的代谢，而且处理过的细胞不会重新感染支原体。另外，配合支原体检测试剂盒（市场上有售，如美国ICN公司的产品），可以帮助尽快发现支原体的污染。
