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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温保存
- 保质期:
见标签
- 库存:
现货
- 供应商:
鹿森生物
- 规格:
瓶装
一般描述
免疫金标记是一种用胶体金标记抗体的技术,特别是二抗。这些金标记的抗体产生电子致密颗粒,使用电子显微镜可观察到这些颗粒。
应用
生化/生理作用
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文献和实验,通过预染蛋白marker来确定电泳停止时间。 (4) 湿转法,转膜条件:300mA恒流;0.45um孔径PVDF膜,转膜时间1h。转膜完成后丽春红染色试剂对膜进行染色,观察转膜效果。 (5) 封闭:将膜完全浸没于5%BSA-TBST中,水平摇床孵育2h(RT)。 (6) 一抗孵育:5%BSA-TBST稀释一抗, 4℃水平摇床孵育过夜。 (7) 次日,洗膜:TBST洗3次,每次10min。 (8) 二抗孵育:5%BSA-TBST稀释二抗:山羊抗兔,山羊抗鼠IgG(H+L)HRP
(抗体的体积至少要覆盖膜表面,防止干燥。)。 一抗可回收再次使用(如连续使用放置4?C,否则放置-20?C)。 洗去一抗:25℃条件下,摇床转速为75转/分钟,用PBST洗膜3次,每次在恒温摇床上振荡10分钟。 3.5 二抗结合 加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔或抗鼠IgG (1:3000,制备时封闭液和PBST的比例为1:1),37℃,60转/分钟,在恒温摇床上振荡60分钟。 洗去二抗:25℃条件下,摇床转速为75转/分钟,用PBST洗膜3次,每次在恒温摇床上振荡10分钟
含量。 二、试剂(以apob为例) 1、琼脂糖。 2、巴比妥钠缓冲液(μ=0.05,ph=8.6):巴比妥钠10.30g,巴比妥1.84g、甘氨荎1.0g、peg 60004g,加900ml水加温助溶,待冷,加1mol/l调ph至8.6,混匀,转入1000ml容量瓶内,再加水到刻度,测试ph后装瓶待用。 3、羊抗人apob血清(效价1:128以上)。 4、apob标准血清。 5、固定液:1%鞣酸或10%三氯醋酸。
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