通用LAMP试剂盒

通用LAMP试剂盒运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。最好在专门的区域操作。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

breast ductal carcinoma    培养基：    L-15+10%FBS
BT-474 [BT474]人乳腺导管癌细胞    英文名称：    BT-474 [BT474] human breast ductal carcinoma cells    培养基：    1640+10% FBS
BT-549人乳腺管癌细胞    英文名称：    BT-549 human breast duct carcinoma cells    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
T-47D人乳腺管癌细胞    英文名称：    T-47D human breast duct carcinoma cells    培养基：    DMEM培养基+10%FBS
CCD-1095Sk人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞    英文名称：    CCD-1095Sk human breast infiltrating duct carcinoma adjacent skin cells    培养基：    MEM培养基(GIBCO)+10%FBS
SK-BR-3人乳腺腺癌细胞    英文名称：    SK-BR-3 human breast adenocarcinoma cells    培养基：    DMEM培养基+10%FBS
HFL1人胚肺成纤维细胞    英文名称：    HFL1 in human embryo lung fibroblasts    培养基：    F12K培养基+10%FBS
Calu-6人退行性癌细胞    英文名称：    Calu-6 human degenerative cancer cells    培养基：    MEM培养基(GIBCO)+10%FBS
A549人非小细胞肺癌细胞    英文名称：    A549 cells in human non small cell lung cancer    培养基：    F-12K+10% FBS
NCI-H358人非小细胞肺癌细胞    英文名称：    NCI-H358 cells in human non small cell lung cancer    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞    英文名称：    NCI-H1650 cells in human non small cell lung cancer    培养基：    1640+10%FBS
HCC827人非小细胞肺癌细胞    英文名称：    HCC827 cells in human non small cell lung cancer    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
NCI-H292人肺癌细胞(淋巴结转移)    英文名称：    NCI-H292 human lung cancer cells (lymph node metastasis)    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
MSTO-211H人肺癌细胞株    英文名称：    Human lung cancer cell line MSTO-211H    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
SK-MES-1人肺鳞癌细胞    英文名称：    SK-MES-1 human lung squamous carcinoma cells    培养基：    MEM培养基(GIBCO)+10%FBS
Calu-3人肺腺癌 (胸水)    英文名称：    Calu-3 human lung adenocarcinoma (hydrothorax)    培养基：    MEM(GIBCO)+10%FBS
NCI-H1395人肺腺癌细胞    英文名称：    Human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1395    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
95-D人高转移肺癌细胞    英文名称：    Human high metastatic lung cancer cell line 95-D    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
Calu-1人肺癌细胞    英文名称：    Calu-1 human lung cancer cells    培养基：    McCOY's 5A+10%FBS
NCI-H1975人肺腺癌细胞    英文名称：    Human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1975    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
IMR-32人神经母细胞瘤细胞    英文名称：    IMR-32 human neuroblastoma cells    培养基：    MEM培养基(GIBCO)+10%FBS
NCI-H661人大细胞肺癌细胞    英文名称：    NCI-H661 large cell lung cancer cell    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞    英文名称：    NCI-H1299 cells in human non small cell lung cancer    培养基：    RPMI-1640(GIBCO）+10%FBS
A-673 人横纹肌瘤细胞    英文名称：    A-673 rhabdomyoma cells    培养基：    DMEM培养基+10%FBS
RD人恶性胚胎横纹肌瘤细胞    英文名称：    RD human malignant embryonal rhabdomyoma cells    培养基：    DMEM培养基+10%FBS
通用LAMP试剂盒hFOB 1.19人SV40转染成骨细胞    英文名称：    The hFOB 1.19 SV40 was transfected into osteoblasts    培养基：    DMEM/F12（1:1）+10% FBS+300μg/ml G418
MG-63人骨肉瘤细胞    英文名称：    Human osteosarcoma cell line MG-63    培养基：    MEM培养基(GIBCO）+10%优质热灭活FBS
SW 1353人软骨肉瘤细胞    英文名称：    SW 1353 in human chondrosarcoma cells    培养基：    L-15培养基+10%FBS
    使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（最好用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
数据采集：
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时，最大吸收光谱在 471nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500nm，最大发射光谱在 530nm。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。