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- 博泰九州
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- 2025年07月16日
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5ug/20ug/100ug/支
赖氨酰内肽酶(1ysylendopeptidase，LEP) 最早是由Masaki等人从无色杆菌（Achromobacter lyticus M497-1）中分离得到，是一种能够特异性地酶切蛋白或者多肽链中赖氨酸（Lysine, Lys）的C端氨基酸残基(包括脯氨酸、谷氨酸)的丝氨酸蛋白酶，故而也常称作Lys-C酶。后来, 研究人员又从溶杆菌（Lysobacter enzymogenes）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[3]中也分别获得了与LEP同功能的赖氨酰胺内切酶。Lys-C酶广泛应用于蛋白质组学研究、多肽测序、酶催化合成、磷酸化肽的鉴定、二硫键分析等领域。我公司选用更具优势的A.lyticus来源，克服大肠杆菌重组表达技术难题，制备产品。最适反应pH9.0~9.5,等电点为pH6.9~7.0;最适反应温度30~37℃，50℃以上稳定性下降。该酶稳定性较好，在4mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6hr后，生物活性未发生降低。生物活性受DFP、PMSF、TLCK抑制。
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文献和实验纯化和检测标签蛋白的表达。 图1 Gateway技术的灵活性 目的基因克隆进入门载体后，可以同时转移目的基因到多个目的载体。 Gateway利用了位点特异重组，所以在构建入门载体后，不再需要使用限制性内切酶和连接酶。一旦您拥有了一个入门克隆，就可以多次使用它，转移您的目的基因到Gateway改造过的各种表达载体（目的载体）。 此外，由于在重组时DNA片段的阅读框和方向保持不变，因而您不必再为新的表达克隆测序担心。在使用每一种新的表达系统时，将会节省您更多的时间。 二、一项
。但是有一点我可以有很大把握的说：对于真核表达，密码子优化只能起锦上添花的作用（确认有表达，以此来提高表达量），而不能雪中送炭（没有表达出来，通过密码子优化极有可能不奏效）。 4、质粒不稳定或者质粒丢失。pET系统通常比较稳定。但是你选用带氨苄青霉素抗性的载体时，也许有可能产生β-lactamase降解了抗生素，使质粒丢失。还有一种情况是表达重组的毒素蛋白，对宿主细胞也有毒性，造成质粒丢失。这种情况多见于真核表达系统。 5、蛋白酶将蛋白降解了。这种情况常由重组蛋白本身的N-或C-端序列引起
大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用
双酶切后，嵌入表达载体pTrc-99B的NcoI和HindIII两个酶切位点间的切口内。得到的LeuRS 6个变种酶基因的正确性用DNA测序证实。 2. LeuRS及其变种酶基因的表达和纯化 1) 将含有LeuRS及其六个变种酶LeuRS-E292K，LeuRS-E292F，LeuRS-E292S，LeuRS-E292D，LeuRS-E292Q，LeuRS-E292A的基因的重组质粒转化到在大肠杆菌菌株TG1中，挑选含有正确质粒的转化子至5 mL氨节
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