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上海达为科生物科技有限公司
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细胞DAPI染色实验
一、实验材料与试剂配置
1. 核心试剂
- DAPI原液:1 mg/mL(溶于无菌去离子水或DMF),避光保存于-20℃,有效期2年。
- 固定剂:4%多ju甲醛(常规细胞)或甲醇(需快速穿透样本),4℃保存。
- 通透剂:0.1-0.5% Triton X-100(贴壁细胞)或0.1% Tween-20(悬浮细胞)。
- 抗淬灭剂:含DAPI的Vectashield®或ProLong® Gold。
2. 工作液配制
| 溶液类型 | 浓度 | 配制方法 | 应用场景 |
|---|---|---|---|
| 储备液 | 1 mg/mL | 1 mg DAPI溶于1 mL去离子水或DMF,超声助溶 | 长期储存 |
| 中间稀释液 | 300 μM | 取2.1 μL储备液加入100 μL PBS | 预实验浓度梯度测试 |
| 染色工作液 | 0.1-1 μg/mL | 取1-10 μL中间液加入1 mL PBS | 常规染色(活/死细胞) |
| 固定染色混合液 | 0.5 μg/mL | 直接加入4%多ju甲醛中 | 同步固定与染色 |
二、标准化操作流程
1. 贴壁细胞染色(以24孔板为例)
- 固定:吸弃培养基,加入4%多ju甲醛(1 mL/孔),室温15分钟。
- 通透:PBS洗涤3次,加入0.1% Triton X-100(1 mL/孔),室温10分钟。
- 染色:加入300 nM DAPI工作液(200 μL/孔),避光孵育5分钟。
- 洗涤:PBS冲洗3次(每次2分钟),去除游离染料。
- 封片:滴加抗淬灭剂(10 μL/孔),盖玻片轻压排气泡,4℃避光保存。
2. 悬浮细胞染色
- 离心富集:200×g离心5分钟,弃上清,PBS重悬至1×10⁶ cells/mL。
- 固定染色:加入4%多ju甲醛(终浓度2%)和DAPI(终浓度0.5 μg/mL),冰上避光30分钟。
- 洗涤:PBS洗涤2次,重悬于100 μL PBS,流式细胞仪检测或涂片观察。
3. 组织切片染色
- 脱蜡水化:二甲苯梯度脱蜡,乙醇梯度复水至PBS。
- 抗原修复:柠檬酸钠缓冲液(pH 6.0)95℃处理20分钟(可选)。
- 染色封片:滴加DAPI工作液(50 μL/片),避光10分钟,甘油封片。

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文献和实验;(2)DAPI工作液室温染色5~20分钟(可根据实验材料的染色结果而定);(3)PBS漂洗;(4)水溶性封片剂封片,游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片;(5)荧光显微镜观察。结果:正常的细胞核呈强荧光,细胞质无荧光;固定的组织细胞同样处理,亦可得到相似的染色结果。在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光,在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters),腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。
用DAPI进行细胞染色DAPI的配置Stock solution of 1mg/ml in ddH2O; working solution of 0.25mg/ml to 50mg/ml in ddH2O or PGM.1.Place sample on slide.2.Add a few drops working solution.3.Squash and view.Staining � DAPI Staining for Cells:Separately DAPI staining
前一段时间做干细胞的DAPI染色,把自己收集的一些相关资料和自己的经验写在这里,希望能够给做DAPI染色的战友一点帮助。 将培养中的细胞进行DAPI染色,标记细胞核。 DAPI保存:放在4℃保存。 DAPI配制:使用无菌三蒸水溶解,可以将10mgDAPI溶解在10ml水中,使用冻存管分装,每一管1ml,-20℃冻存。使用的时候,先取一管放在4℃。 染色:把培养皿中的培养基换一次液,每一个皿中放4-8ml培养基,使用微量加样器加DAPI到培养皿中。浓度 50ug/ml










