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- 2025年12月25日
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上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
细胞DAPI染色实验
一、实验材料与试剂配置
1. 核心试剂
- DAPI原液：1 mg/mL（溶于无菌去离子水或DMF），避光保存于-20℃，有效期2年。
- 固定剂：4%多ju甲醛（常规细胞）或甲醇（需快速穿透样本），4℃保存。
- 通透剂：0.1-0.5% Triton X-100（贴壁细胞）或0.1% Tween-20（悬浮细胞）。
- 抗淬灭剂：含DAPI的Vectashield®或ProLong® Gold。
2. 工作液配制
| 溶液类型 | 浓度 | 配制方法 | 应用场景 |
|---|---|---|---|
| 储备液 | 1 mg/mL | 1 mg DAPI溶于1 mL去离子水或DMF，超声助溶 | 长期储存 |
| 中间稀释液 | 300 μM | 取2.1 μL储备液加入100 μL PBS | 预实验浓度梯度测试 |
| 染色工作液 | 0.1-1 μg/mL | 取1-10 μL中间液加入1 mL PBS | 常规染色（活/死细胞） |
| 固定染色混合液 | 0.5 μg/mL | 直接加入4%多ju甲醛中 | 同步固定与染色 |
二、标准化操作流程
1. 贴壁细胞染色（以24孔板为例）
- 固定：吸弃培养基，加入4%多ju甲醛（1 mL/孔），室温15分钟。
- 通透：PBS洗涤3次，加入0.1% Triton X-100（1 mL/孔），室温10分钟。
- 染色：加入300 nM DAPI工作液（200 μL/孔），避光孵育5分钟。
- 洗涤：PBS冲洗3次（每次2分钟），去除游离染料。
- 封片：滴加抗淬灭剂（10 μL/孔），盖玻片轻压排气泡，4℃避光保存。
2. 悬浮细胞染色
- 离心富集：200×g离心5分钟，弃上清，PBS重悬至1×10⁶ cells/mL。
- 固定染色：加入4%多ju甲醛（终浓度2%）和DAPI（终浓度0.5 μg/mL），冰上避光30分钟。
- 洗涤：PBS洗涤2次，重悬于100 μL PBS，流式细胞仪检测或涂片观察。
3. 组织切片染色
- 脱蜡水化：二甲苯梯度脱蜡，乙醇梯度复水至PBS。
- 抗原修复：柠檬酸钠缓冲液（pH 6.0）95℃处理20分钟（可选）。
- 染色封片：滴加DAPI工作液（50 μL/片），避光10分钟，甘油封片。
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文献和实验；(2)DAPI工作液室温染色5～20分钟(可根据实验材料的染色结果而定)；(3)PBS漂洗；(4)水溶性封片剂封片，游离细胞也可直接用含DAPI的PBS封片；(5)荧光显微镜观察。结果：正常的细胞核呈强荧光，细胞质无荧光；固定的组织细胞同样处理，亦可得到相似的染色结果。在有支原体污染的细胞质和细胞表面可见孤立的点状荧光，在感染痘苗病毒的细胞质中存在独特的“星状”荧光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞质中也可出现荧光。
用DAPI进行细胞染色DAPI的配置Stock solution of 1mg/ml in ddH2O; working solution of 0.25mg/ml to 50mg/ml in ddH2O or PGM.1.Place sample on slide.2.Add a few drops working solution.3.Squash and view.Staining � DAPI Staining for Cells:Separately DAPI staining
前一段时间做干细胞的DAPI染色，把自己收集的一些相关资料和自己的经验写在这里，希望能够给做DAPI染色的战友一点帮助。 将培养中的细胞进行DAPI染色，标记细胞核。 DAPI保存：放在4℃保存。 DAPI配制：使用无菌三蒸水溶解，可以将10mgDAPI溶解在10ml水中，使用冻存管分装，每一管1ml，－20℃冻存。使用的时候，先取一管放在4℃。 染色：把培养皿中的培养基换一次液，每一个皿中放4－8ml培养基，使用微量加样器加DAPI到培养皿中。浓度 50ug/ml
