细胞DAPI染色实验

一、实验材料与试剂配置

1. 核心试剂

• DAPI原液：1 mg/mL（溶于无菌去离子水或DMF），避光保存于-20℃，有效期2年。
• 固定剂：4%多ju甲醛（常规细胞）或甲醇（需快速穿透样本），4℃保存。
• 通透剂：0.1-0.5% Triton X-100（贴壁细胞）或0.1% Tween-20（悬浮细胞）。
• 抗淬灭剂：含DAPI的Vectashield®或ProLong® Gold。

2. 工作液配制

二、标准化操作流程

1. 贴壁细胞染色（以24孔板为例）

1. 固定：吸弃培养基，加入4%多ju甲醛（1 mL/孔），室温15分钟。
2. 通透：PBS洗涤3次，加入0.1% Triton X-100（1 mL/孔），室温10分钟。
3. 染色：加入300 nM DAPI工作液（200 μL/孔），避光孵育5分钟。
4. 洗涤：PBS冲洗3次（每次2分钟），去除游离染料。
5. 封片：滴加抗淬灭剂（10 μL/孔），盖玻片轻压排气泡，4℃避光保存。

2. 悬浮细胞染色

1. 离心富集：200×g离心5分钟，弃上清，PBS重悬至1×10⁶ cells/mL。
2. 固定染色：加入4%多ju甲醛（终浓度2%）和DAPI（终浓度0.5 μg/mL），冰上避光30分钟。
3. 洗涤：PBS洗涤2次，重悬于100 μL PBS，流式细胞仪检测或涂片观察。

3. 组织切片染色

1. 脱蜡水化：二甲苯梯度脱蜡，乙醇梯度复水至PBS。
2. 抗原修复：柠檬酸钠缓冲液（pH 6.0）95℃处理20分钟（可选）。
3. 染色封片：滴加DAPI工作液（50 μL/片），避光10分钟，甘油封片。