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- 2025年12月25日
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上海达为科生物科技有限公司
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细胞JC-1染色实验
| 品牌 | 其他品牌 | 应用领域 | 医疗卫生,生物产业 |
|---|
细胞JC-1染色实验是达为科生物的基础服务项目之一，由经验丰富的实验人员操作完成。
JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(~525nm)为主;而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在-定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na和H流调控。当线粒体状态良好时对JC-1摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-1的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membranepotential),而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1 染色被用于检测调亡的早期发
生。其实验方法如下：
首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1 ~ 5mg/ml)，储存于-20C，用时以培养液稀释至10ug/ml 终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min 后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。
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文献和实验一、样本准备 收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300g 离心 5 min，弃上清。 向细胞中加入适量细胞染色 buffer(或含1%BSA的PBS)，用移液枪轻轻吹打细胞重悬。 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL。 三、设置实验分组 根据实验设计，设置实验分组，每管加入 100μL 细胞悬液。 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗
实验目的 掌握细胞计数的方法。 了解区分细胞存活状态的方法。 实验用品 0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉 普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。 实验原理 在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞
一、样本准备 详见流式细胞术样本制备技术、流式实验样本制备方法及注意事项 收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300 g 离心 5 min，弃上清 向细胞中加入适量细胞染色 buffer（或含 1%BSA 的 PBS），用移液枪轻轻吹打细胞重悬 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL 三、设置实验分组 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗能和 Fc
