细胞生长曲线测定服务

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细胞生长曲线测定服务是达为科生物的基础服务项目之一，由细胞平台经验丰富的实验人员操作完成。

细胞生长曲线的测定背景与原理:
生长曲线是测定细胞生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮后贴壁, 随后渡过长短不同的潜伏期,即进入快速生长的指数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入平台期,然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化,需连续对细胞进行计数。通常计数6天。为准确起见,一般每次实验设3个平行重复。
材料、试剂与仪器
1、实验材料:
Hela细胞系。
2、实验试剂:
DMEM培养基(青霉素,链霉素 , 10%血清, 0.25%胰蛋白酶溶液，台酚蓝染液。
3、实验仪器:
超净工作台, co₂培养箱,倒置显微镜,微量移液器,血细胞计数板,培养瓶,离心管，移液管,废液缸,盖玻片，24孔板。
方法与步骤
1、取生长良好的细胞,用培养基制成细胞悬液后计数。根据细胞计数结果按5x104/mL作传代培养接种于24孔板中,共接种21孔细胞。1 m/孔。余下三孔可设传代培养的对照。
2、24h后每天记录细胞数目,每次取3孔细胞,分别进行计数。计算平均值。连续计数7d。细胞用胰酶消化后加入一定量的培养基混匀制成细胞悬液。取少量悬液与台酚蓝1:1混台。取一干净的血细胞计数板,盖上盖片,从盖片两边滴入细胞悬液使之充满计数板和盖片之间。注意滴液勿有气泡,也不能太多，否则会使盖片浮起而使细胞计数不准。
3、低倍镜下观察,活细胞不着色,台盼蓝着色的细胞呈深蓝色,是不健康或已死亡的细胞,不能计数。
找出计数板上的方格,计算四角大格内总细胞数,大格线者只计左侧和上方,不计右侧和下方细胞悬液中细胞

密度计算公式为:细胞数mL= (四角大格内细胞数/4) x104x2
4、根据细胞计数结果,以单位细胞数(细胞数mL)为纵坐标,以时间为横坐标绘制生长曲线。