- ￥568
- 雅酶
- YJ104
- 2025年12月27日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
1 mL×10
His标签蛋白纯化琼脂糖凝胶
Ni-Agarose Resin
本产品 4℃运输；保存于 4℃，禁止产品冻结，长期存放请保证试剂管竖立向上，保质期 24 个月。
货号规格
goodYJ104 1 mL×10
产品简介
good本产品可以用于纯化各种表达系统融合表达的 His 重组蛋白，其是以高度交联的 4% 琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联三配位的亚氨基二乙酸 (IDA)，并螯合镍离子 (Ni2+)，形成比较稳定的平面四边形结构，从而有更多的位点与 His 标签上的咪唑环继续配位，达到结合目的蛋白的效果。
产品参数
自备试剂
| 缓冲液 | 推荐配方 |
| 平衡缓冲液 | 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, pH 8.0 |
| 漂洗缓冲液 | 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazole, pH 8.0 |
| 洗脱缓冲液 | 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazole, pH 8.0 |
goodgood注：所用去离子水和缓冲液在使用前建议用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤，减少杂质，以提高蛋白纯化效率和防止堵塞纯化柱。
操作步骤
good◆ 样本处理(以大肠杆菌表达系统为例)
good◆gg1. 离心收集大肠杆菌(4℃，4,000×g，30 min)，弃上清；
good◆gg2. 用冷平衡缓冲液重悬细胞，同时加入蛋白酶抑制剂(货号：GRF101)；
good◆gg2. 注：所用试剂中不能含有 EDTA、EGTA 等螯合剂，DTT、巯基乙醇等还原剂，尿素、盐酸胍等变性剂。
good◆gg3. 用超声波破碎法在冰上破碎菌体，直到样品破碎完全；
good◆gg4. (可选)如果裂解物太过粘稠，可以加入RNase A(终浓度10 μg/mL)和DNase I(终浓度5 μg/mL)并在冰上孵育10~15 min；
good◆gg5. 离心收集上清(4℃，12,000×g，20 min)；
good◆gg6. SDS-PAGE 分析His融合蛋白的含量及可溶性；
good◆ 纯化重组His融合蛋白
good◆gg7. 轻轻重悬 His标签蛋白纯化琼脂糖凝胶 ，吸取适量加入重力柱中，用5~10倍柱体积的冷 平衡缓冲液 平衡His琼脂糖凝胶；
good◆gg8. 将步骤5制备好的含有His融合蛋白的上清液加入到纯化柱中，流速控制为0.5~1 mL/min；
good◆gg9. 蛋白上清液全部流出纯化柱后，立刻加入 漂洗缓冲液 清洗纯化柱，所需量大约为柱体积的 10~20倍或者直到流出液的A280值达到最低且稳定；
good◆g10. 用5~10倍柱体积的现配 洗脱缓冲液 以0.5~1 mL/min的流速洗脱，收集洗脱液。或者根据流出液A280值判断，当数值陡然上升时开始接收洗脱液，直到A280数值降至最低且稳定时，停止收集。后续可根据目的蛋白的性质和用途，4℃透析到20 mM Tris-HCl，pH 8.0或者1×PBS，pH 7.4中。
good◆ 凝胶再生及储存
good◆ His标签蛋白纯化琼脂糖凝胶 可以重复使用，但随着使用次数增多，非特异性结合的蛋白聚集往往会造成流速和蛋白结合载量的下降，此时便需要对琼脂糖凝胶填料进行清洗。
good◆g11. 使用5倍纯化柱体积去离子水清洗琼脂糖凝胶填料；
good◆g12. 使用5倍柱体积100 mM EDTA(pH 8.0)剥落镍离子；
good◆g13. 使用10倍柱体积去离子水清洗填料；
good◆g14. 使用5倍柱体积0.5 M NaOH清洗填料；
good◆g15. 使用10倍柱体积去离子水清洗填料；
good◆g16. 使用3~5倍柱体积100 mM NiSO4再生挂镍；
good◆g17. 使用10倍柱体积去离子水清洗，即完成琼脂糖凝胶填料再生。
good◆g10. 注：填料再生后，可以立即使用，如不立即使用，需要将填料悬浮于等体积的20%乙醇中，置于4℃保存。
注意事项
good1. 琼脂糖凝胶应保存在储存溶液中，防止干燥；
good2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
good3. 本产品仅限科研使用。
常见问题解析
| 问题 | 原因 | 解决方案 |
| 洗脱组分中没有目的蛋白 | 目的蛋白可能是包涵体，上清无蛋白 | 可以通过电泳检测蛋白提取上清中是否含有目的蛋白，包涵体蛋白需要按照相应纯化方式处理 |
| 目的蛋白表达量太低 | 优化表达条件 | |
| 目的蛋白结合比较弱，在漂洗步骤被洗脱丢失 | 提高漂洗缓冲液的pH值，或者降低咪唑的浓度 | |
| 目的蛋白被蛋白酶降解 | 在裂解步骤或洗涤步骤加入适量的蛋白酶抑制剂 | |
| 目的蛋白不能有效地从琼脂糖凝胶填料上洗脱下来 | 降低洗脱缓冲液的pH值，或者增加洗脱缓冲液中咪唑的浓度 | |
| 使用10~100 mM EDTA溶液剥离镍离子，同时得到目 的蛋白 |
||
| 回收的重组蛋白纯度不够 | 漂洗不彻底 | 增加漂洗缓冲液的用量 |
| 样品中含有其它His标签蛋白 | ①通过调节pH值，或者咪唑浓度来优化漂洗条件 ②通过使用其它纯化方式(如离子交换，疏水等)进一步纯化洗脱组分 |
|
| 上样过程中蛋白发生沉淀 | 蛋白浓度太高 | 适当稀释蛋白 |
| 操作温度太低 | 室温下进行上样 | |
| 蛋白发生聚集 | 在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂，如0.1%的Triton X-100或者Tween-20 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验His 标签蛋白纯化效果不理想，宝宝心里苦呀。今天，小编来跟大家一起找找原因。 纯化所得组分中没有收集到重组的His标签蛋白。该问题主要可以分为以下两个方面： 1、His标签蛋白没有结合到填料上就流穿了 原因一 超声的功率不对。超声功率过高，容易导致蛋白炭化；功率过低，蛋白释放不出来。 建议 改变超声功率，同时可以在超声前加入溶菌酶。 原因二 结合缓冲液条件不合适。 建议 检查结合缓冲液中是否有影响结合的因素，如：金属离子螯合剂、强还原剂、过高的咪唑浓度。同时，优化缓冲液的pH、盐
Purification of 6xHis epitope tagged proteins by Ni-NTA-Agarose His标签蛋白纯化
Low (“Low”)Imidazole Buffer 0.5L 100mM Imidizole 3.4g 5% glycerol 25ml 100% glycerol 50mM Tris-HCl (pH 7.9)50ml 0.5M Tris-HCl (pH 7.9) 0.1% Tween-20 0.5M 100% Tween-20 500mM NaCl50ml 5M NaCl dH2O Fill to 0.5L (start w/ 350ml) High (“High
佚名 ［摘要］ 目的：观察洛美沙星眼药水治疗眼部细菌性疾病的疗效。方法：166例，男性91例，女性75例，年龄37 a± s 16 a(18～65 a)；结膜炎92例，角膜炎74例；洛美沙星组(104例，男性54例，女性50例)，用0.3%洛美沙星眼药水；氧氟沙星组62例(男性35例，女性27例)，用0.3%氧氟沙星眼药水，均6次.d-1，每次1滴，7 d为一个疗程；治疗
