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- 2026年01月08日
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- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
免疫组化实验
一、免疫组化技术原理与核心步骤
1. 技术原理
- 抗原-抗体反应：利用一抗特异性识别靶蛋白（如TLR4、NF-κBp65），二抗（酶标或荧光标记）放大信号，通过显色剂（如DAB）或荧光成像实现可视化。
- 定位与定量：可区分蛋白在细胞核、质或膜中的分布，结合图像分析软件（如IPP 6.0）进行半定量评分。
2. 标准化操作流程
根据文献整合，典型流程包括以下步骤：
- 样本制备：
- 结肠组织经10%中性甲醛固定24-48小时，梯度乙醇脱水，石蜡包埋后切片（厚度4-5 μm）。
- 需使用防脱载玻片（如多聚赖氨酸包被）防止组织脱落。
- 抗原修复：
- 微波法：枸橼酸盐缓冲液（pH 6.0）加热至沸腾，维持10-15分钟。
- 高压修复：适用于顽固抗原（如膜蛋白），121℃高压处理20分钟。
- 封闭与一抗孵育：
- 5% BSA或血清封闭非特异性结合位点15-30分钟。
- 一抗稀释度根据靶标优化（如TLR4 1:200，NF-κBp65 1:2000），4℃湿盒过夜。
- 信号放大与显色：
- 酶标二抗（HRP标记）37℃孵育20分钟，DAB显色控制至棕黄色颗粒出现。
- 苏木素复染细胞核，梯度乙醇脱水，中性树胶封片。
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文献和实验一、石蜡切片和冰冻切片的比较？ 1、要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。 2、冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写
不完全，若存在，需延长脱蜡时间或换用新的二甲苯。 （5）抗原修复不完全：对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合。 （6）细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应：可加入组织透化步骤，进行细胞膜或核膜的透化。 （7）试剂盒保存不当：请于 4℃ 进行保存，勿室温防止过长时间。 （8）封闭时间过长：若使用封闭液进行封闭，请排除封闭液对抗原抗体结合的影响。 Q2：免疫组化染色弱怎么办？ （1）抗体浓度过低，孵育时间过短：可提高抗体浓度，进行抗体4℃过夜孵育。 （2）组织
管树军621 各位大侠，我在论坛上看到大家检测NF/KB与IKBa用的都是WB的方法,我想用免疫组化的方法，好出结果吗，两者相比那种方法更容易出结果呢？我只想只一个好出结果的方法并且试剂相对便宜一些。谢谢！请高手指点。我的邮箱是guanshujun621@163.com 00501101 如果你是硕士的话，可以骗过国内的人，蒙混过毕业就行了 如果你是博士的话，要发SCI，请不要用组化代替wb，老外没有人这样代替
