转基因元件Rice Actin 1启动子染料法qPCR试剂盒

转基因元件Rice Actin 1启动子染料法qPCR试剂盒

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  • 2025年07月15日
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      上海抚生

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    转基因元件Rice Actin 1启动子染料法qPCR试剂盒原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
    特异性强
      PCR反应的特异性决定因素为:
      ①引物与模板DNA特异正确的结合;
      ②碱基配对原则;
      ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
      ④靶基因的特异性与保守性。
    转基因元件Rice Actin 1启动子染料法qPCR试剂盒
    大鼠卵泡抑素(FS)免疫试剂盒    GLT28D1    糖基转移酶28家族1抗体
    大鼠卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)免疫试剂盒    GLT6D1    糖基转移酶6结构1抗体
    大鼠硫氧还蛋白还原酶(TrxR)免疫试剂盒    GLTSCR2    胶质瘤抑癌候选基因2抗体
    大鼠硫氧化还原蛋白(Trx)免疫试剂盒    Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser226)    磷酸化糖皮质激素受体抗体
    大鼠硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)免疫试剂盒    GLUT6    葡萄糖转运蛋白6抗体
    大鼠硫酸类肝素(HS)免疫试剂盒    Glucocorticoid Receptor beta    糖皮质激素受体β抗体
    大鼠流行性乙型脑炎(JE)抗体(IgG)免疫试剂盒    Glucose 6 phosphatase 2    胰岛葡萄糖6磷酸酶2抗体
    大鼠流行性出血热IgG抗体免疫试剂盒    Glucose Oxidase    葡萄糖氧化酶抗体
    大鼠磷脂酰肌醇抗体IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)免疫试剂盒    Glucosidase 2 subunit beta    葡萄糖苷酶2β/Glucosidase IIβ抗体
    大鼠磷脂酶A2(PL-A2)免疫试剂盒    GLUD2    谷氨酸脱氢酶2抗体
    大鼠磷酸烯醇式酸羧激酶(PCK)免疫试剂盒    phospho-GluR1 (Thr840)    磷酸化谷氨酸受体1抗体
    大鼠磷酸激活谷氨酰胺酶(PAG)免疫试剂盒    GGH    γ-谷氨酰水解酶抗体
    大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)免疫试剂盒    Glutamyl Prolyl tRNA synthetase/ProRS    谷氨酰-脯氨酰-tRNA合成酶抗体
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    大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)免疫试剂盒    GYG2    糖原蛋白2抗体
    转基因元件Rice Actin 1启动子染料法qPCR试剂盒大鼠磷酸化蛋白激酶B(P-PKB)免疫试剂盒    GALT    磷酸半乳糖尿苷酸转移酶1抗体
    大鼠磷酸化Tau蛋白(pMAPT/pTAU)免疫试剂盒    GYG1    糖原蛋白1抗体
    大鼠磷蛋白关联鞘糖脂微区1(PAG1)免疫试剂盒    Glycogen synthase 2    葡萄糖合成酶2抗体
    大鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)免疫试剂盒    GOT2    谷草转氨酶2抗体
    大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)免疫试剂盒    Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase    葡萄糖-6磷酸脱氢酶抗体
    大鼠亮氨酰氨基肽酶(LAP)免疫试剂盒    GLUT5    葡萄糖转运蛋白5抗体
    大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)免疫试剂盒    Glycogen    葡萄糖合成酶1抗体
    大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)免疫试剂盒    GPATCH8    G


    产品特点:
    灵敏度高:可检测个位拷贝数的基因
    特异性高:有效避免非特异性扩增的出现
    稳定性高:复孔间差异小,实验结果重复性强
    扩增性能优:扩增效率高,荧光信号强
    检测特异性与灵敏度:
    高性能的UNICONTM Taq热启动酶及组分优化的反应体系保证高度的特异性扩增,提升了扩增效率,使得UNICONTM qPCR Master Mix具有极高的检测灵敏度。以人293T细胞cDNA为模板,在相同条件下扩增低拷贝hbcl6基因,与同类产品相比,UNICONTM qPCR Master Mix具有更好的扩增特异性、更高的扩增效率及更好的复孔重复性,检测灵敏度更高。
    检测步骤:
    一、 试剂的准备
    从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
    设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
    试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
    荧光PCR反应液 14µL N×14µL
    酶混合物 1 µL N×1 µL
    总量 15 µL N×15µL
    (1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
    7.2 qPCR反应条件
    将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
    推荐循环条件:
    1循环 50℃ for 2 min
    预变性 1循环 95℃ for 10 min
    PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
    60℃ for 60 sec
    在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
    转基因元件Rice Actin 1启动子染料法qPCR试剂盒
    PCR实验步骤:
      ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
      ②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
      ③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。
    此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
      ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
      ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
      ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,
    获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定   先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

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