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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
一年
- 英文名:
Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Californicum
- 库存:
10000
- 供应商:
上海炎熙生物科技有限公司
- 规格:
20个反应/50个反应/100个反应
| 规格: | 20个反应 | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50个反应 | 产品价格: | ¥1300.0 |
| 规格: | 100个反应 | 产品价格: | ¥2300.0 |
探针法加利福尼亚支原体实时定量PCR试剂盒
Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Californicum
货号:Mqt-cal-20 规格:20个反应
货号:Mqt-cal-50 规格:50个反应
货号:Mqt-cal-100 规格:100个反应
储存:-20度,避光保存,有效期一年。避免反复冻融。
试剂盒特点:
- 特异性检测加利福尼亚支原体,与其他生物没有交叉反应。
- 灵敏度高,检测极限相当于反应液中约含1个拷贝。
- 使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点;采用热启动方式,可抑制非特异性扩增,降低背景荧光。
- 带有阳性对照样品(组分C),可用于检验试剂盒有效性。
- 带有UDG酶和dUTP,可降低残留DNA的污染。
加利福尼亚支原体(Mycoplasma Californicum)是流行性仅次于牛支原体(Mycoplasma Bovis)的致病性牛寄生支原体,可引起乳腺炎、关节炎、肺炎等疾病,最初于1977年在美国加利福尼亚分离得到。除了乳腺之外,在子宫、肺、发炎的关节等处也可以分离得到加利福尼亚支原体。其引起的乳腺炎与牛支原体相比,传染性更强,症状更为严重,且对抗生素不敏感,如果没有及时隔离的话容易引起较大的经济损失。
传统的支原体检测采用体外培养法,体外培养条件较为苛刻,用时较长,一般需要7-10天时间,操作较为繁琐,并且需要特定的方法来进行鉴定,由于生长缓慢,所以容易受到其他细菌的干扰。高灵敏度和高特异性的PCR法可以有效克服这些缺点,其检测时间短,仅需几个小时即可获得结果。定量PCR法与普通PCR法相比,不仅可以精确定量,而且操作更为方便,更少受环境污染的影响。
本试剂盒选择RNA聚合酶基因作为靶点,特异性识别加利福尼亚支原体,与其他生物基因组不产生交叉反应。检测分布范围相似的16种支原体和20种常见细菌,未见假阳性结果。对281个样本进行检测,获得23个阳性样本,与基因测序结果完全一致,可见本试剂盒具有非常好的特异性。
本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP(以dUTP代替dTTP)、引物、探针、阳性对照品、ROX染料,和用以防止残余DNA污染的UDG(Uracil- DNA Glycosylase,尿嘧啶-DNA-糖基酶),用户只需准备好DNA样品即可使用。
本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌(Thermus thermophilus),经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体,在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段,抗体受热被去除,此时DNA聚合酶活性恢复,因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染,提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。
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文献和实验-time PCR方法克服了由于miRNA分子太短(~22 nt)带来的定量最大难题而引入靶向特异性的反转录引物,该RT引物可以与成熟miRNA结合,形成反转录引物/成熟miRNA复合物,并在miRNA的5’末端延伸。这样就得到一个较长的反转录扩增因子,为进一步做实时定量PCR提供了符合要求的摸板。 RT引物有两种类型: 1. Oligod(T)特异的RT引物(QIAGEN产品为主) 由特异序列+(T)20左右+兼并碱基V或VN组成。(所有miRNA可以公用一个Oligod(T)的RT引物,但是RNA
。3.1 Taqman@探针法Taqman@探针是最早用于定量的方法。就在PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸:5’端标记一个报告荧光基团,3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,也就是FRET反应;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB
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